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BL21 Star (DE3)pLysS甘油菌(低本底蛋白高诱导表达用)
产品编号: D0341
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价格: ¥ 145.00
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D0341 BL21 Star (DE3)pLysS甘油菌(低本底蛋白高诱导表达用) 200μl 145.00元

碧云天生产的BL21 Star (DE3)pLysS甘油菌(BL21 Star (DE3)pLysS Glycerol Stock),是收集生长在对数期的BL21 Star (DE3)pLysS菌,加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。本甘油菌可以直接划平板或小量、大量培养。BL21 Star (DE3)pLysS甘油菌也常被写作BL21 Star (DE3) pLysS甘油菌。

BL21 Star (DE3)pLysS菌株来源于BL21 (DE3),含有rne131突变(RNaseE基因突变),RNaseE基因的突变降低了内源RNase的积累,增强了菌株细胞内mRNA的稳定性,从而提高了异源蛋白的表达水平。

BL21(DE3)是BL21被λ噬菌体DE3溶原化(lysogenization)的衍生菌株,在lacUV5启动子控制下可表达噬菌体T7 RNA聚合酶(相关基因序列已经整合到细菌染色体中)。IPTG可以诱导BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表达,因此BL21(DE3)菌株适合受T7启动子(T7 promoter)调控的目的基因通过IPTG诱导表达。常见的pET系列原核表达载体中目的基因的表达都是受T7启动子调控的,因此都适合用BL21(DE3)作为宿主菌。

BL21 Star (DE3)pLysS菌株在BL21(DE3)基础上改造而成,主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达,同时含有大肠杆菌RNA聚合酶。

BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS,具有氯霉素抗性,可以表达能抑制T7 RNA聚合酶的T7溶菌酶(T7 lysozyme),从而可以抑制T7 RNA聚合酶在目的蛋白被IPTG诱导前的本底表达,即导致本底性的外源重组蛋白的表达被有效抑制。这种情况下特别适合于影响细胞生存和活力的外源毒性蛋白的表达。

BL21 Star (DE3)pLysS菌株与BL21(DE3)pLysS相比,含有rne131突变(RNaseE基因突变),导致细胞内RNaseE缺少,细胞内mRNA稳定性提高,从而可以实现异源蛋白的高表达。BL21 Star (DE3)pLysS菌株主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达,同时含有大肠杆菌RNA聚合酶,也可用于非T7启动子表达载体(pGEX、pMAL等)的蛋白表达。由于BL21 Star (DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高,所以不适合毒性蛋白的表达。BL21 Star (DE3)pLysS菌株携带pLysS,具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的蛋白表达。pLysS质粒含有p15A复制起始子,可以和含有pUC或pBR322等复制起始子的质粒兼容。

BL21 Star (DE3)pLysS菌株基因型:F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm rne131 (DE3)pLysS (CamR)

本菌株可以使用常规的2YT或LB培养基进行培养。

关于碧云天不同甘油菌菌种的比较和选择,可参考我们的相关网页:http://www.beyotime.com/support/strain.htm

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D0341 BL21 Star (DE3)pLysS甘油菌 200μl
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,一年有效。-80℃保存,至少2年有效。

注意事项:

使用本甘油菌时可以不必完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下,菌体会逐渐沉淀至管底,请务必注意适当混匀后使用。

为保证菌种纯正,避免其它细菌污染,尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.划平板接种:
取出甘油菌置于冰上,并置于超净台内,后续操作都在超净台内操作。
a.用镊子和塑料枪头操作:镊子的顶端在70%酒精中蘸一下,并且在酒精灯上略略烧一下,使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200µl塑料枪头,蘸取少量甘油菌,然后把蘸有菌液的塑料枪头,以尽量和2YT或LB平板接近平行的角度,在含34μg/ml氯霉素的2YT或LB平板上连续作S形或Z形划动,再用一无菌的200µl塑料枪头,在原先的划线上以90º或120º角,再在2YT或LB平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
b.用接种环操作:将接种环在酒精灯上略略烧一下,使接种环处于无菌状态。微冷后,蘸取少量甘油菌,在含34μg/ml氯霉素的2YT或LB平板上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下,微冷后,在原先的划线上以90º或120º角,再在2YT或LB平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2-3次即可。37℃倒置培养过夜。
2.直接培养:
取出甘油菌置于冰上,并置于超净台内,后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下,并且在酒精灯上略略烧一下,使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签,蘸取甘油菌,然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3ml 2YT或LB (含34μg/ml氯霉素)的细菌培养试管内或装有100ml或更大体积2YT或LB (含34μg/ml)氯霉素的细菌培养瓶内。37℃,约200rpm培养过夜。
3.感受态细菌的制备:
可以使用碧云天的一步法感受态细菌制备试剂盒(D0301)超级感受态细菌制备试剂盒(D0302)进行感受态细胞的制备。
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