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C2107S BeyoAIE™ Nuclear Green细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒 50次 498.00元

碧云天的BeyoAIE™ Nuclear Green细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒,即BeyoAIE™ Nuclear Green Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit,是一种以细胞核绿色荧光染料BeyoAIE™ Nuclear Green Probe为荧光探针、进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。本试剂盒与传统的使用碘化丙啶(Propidium, PI)的细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒相比,检测灵敏度更高,检测结果更加稳定可靠。

聚集诱导发光(Aggregation-induced emission, AIE)是由中国科学院院士唐本忠教授于2001年提出的原创性新科学概念。具有AIE效应的材料,在分散态下发光微弱甚至不发光,聚集后发光显著增强,呈现出颠覆传统认知的光物理现象。目前AIE已成为生物学、医学、化学、材料等领域的研究热点,多次入选全球热点前沿研究领域[1-3]。

AIE系列荧光探针有如下特点。1. 聚集诱导发光。AIE荧光探针在溶液及细胞环境中能保持微弱的荧光信号,而进入细胞并与目标结构结合聚集后,其荧光信号会大幅度增强,因此在成像过程中可以忽略溶液及细胞中未与特定结构结合的荧光分子,从而在染色后通常可以直接进行成像,无需多次洗涤,可以显著简化成像流程。2. 较大的斯托克斯(Stokes)位移。AIE荧光探针在荧光成像中能够极大程度地避免信号串扰和自淬灭现象,显著提高荧光成像清晰度,从而进一步提升成像精确度。3. 极佳的光学稳定性。AIE荧光探针能在长时间的细胞成像过程中维持稳定的荧光信号输出,特别适用于长期追踪、多次扫描的荧光成像实验。4. 抗淬灭能力强。与传统荧光探针相比,AIE荧光探针能有效规避浓度过高导致的荧光淬灭问题,在高浓度应用场景更有优势[4-6]。

BeyoAIE™ Nuclear Green Probe是一种新型的双链DNA的荧光染料。BeyoAIE™ Nuclear Green Probe和双链DNA结合后可以产生荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被BeyoAIE™ Nuclear Green Probe染色后,可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定,然后根据DNA含量的分布情况,可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。

BeyoAIE™ Nuclear Green Probe染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失,因此凋亡细胞BeyoAIE™ Nuclear Green Probe染色后呈现明显的弱染,即荧光强度小于1,在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰,即凋亡细胞峰。

细胞发生凋亡时,由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂,产生凋亡小体,使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期,细胞对前向角光散射的能力显著降低,对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期,前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。使用本试剂盒检测经凋亡诱导的Jurkat细胞的效果请参考图1。

图1. 碧云天BeyoAIE™ Nuclear Green细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(C2107)检测经凋亡诱导的Jurkat细胞的效果图。Jurkat细胞经适当凋亡诱导后,用70%乙醇固定,经本试剂盒染色后进行流式检测分析细胞周期和细胞凋亡。图中可见凋亡细胞的Sub-G1峰。流式细胞仪检测通道为BV510 (Ex/Em=405/525nm)。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测,则必须把组织消化成单细胞状态,才可以进行检测。

本试剂盒小包装足够检测50个样品,每个样品的细胞数量可以为10-100万。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C2107S-1 Staining Buffer 25ml
C2107S-2 BeyoAIE™ Nuclear Green Probe (1000X) 25μl
C2107S-3 RNase A (50X) 0.5ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,一年有效。BeyoAIE™ Nuclear Green Probe (1000X)须避光保存。

注意事项:

本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。

需自备PBS和70%乙醇,PBS (C0221A)可以向碧云天订购。

荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 细胞样品的准备。
a. 对于贴壁细胞。小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞,至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50μl左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml冰浴预冷的PBS,重悬细胞,并转移到1.5ml离心管内。再次离心沉淀细胞,小心吸除上清,可以残留约50μl左右的PBS,以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
b. 对于悬浮细胞。1000×g左右离心3-5分钟,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50μl左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml冰浴预冷的PBS,重悬细胞,并转移到1.5ml离心管内。再次离心沉淀细胞,小心吸除上清,可以残留约50μl左右的PBS,以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
2. 细胞固定。
加入1ml冰浴预冷70%乙醇中,轻轻吹打混匀,4ºC固定30分钟或更长时间。通常固定2小时或以上更能保证染色效果,固定12-24小时可能效果更佳。1000×g左右离心3-5分钟,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50μl左右的70%乙醇,以避免吸走细胞。加入约1ml冰浴预冷的PBS,重悬细胞。再次离心沉淀细胞,小心吸除上清,可以残留约50μl左右的PBS,以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。
3. BeyoAIE Nuclear Green Staining Solution的配制。
参考下表,根据待检测样品的数量配制适量的BeyoAIE Nuclear Green Staining Solution:
Samples 1 6 12
Staining Buffer 0.5ml 3ml 6ml
BeyoAIE™ Nuclear Green Probe (1000X) 0.5μl 3μl 6μl
RNase A (50X) 10μl 60μl 120μl
BeyoAIE Nuclear Green Staining Solution ~0.5ml ~3ml ~6ml
注:配制好的BeyoAIE Nuclear Green Staining Solution短时间内可以4ºC保存,宜当日使用。
4. 染色。每管细胞样品中加入0.5ml BeyoAIE Nuclear Green Staining Solution,缓慢并充分重悬细胞沉淀,37ºC避光温浴30分钟。随后可以4ºC或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小时内完成流式检测,最好能在当日完成流式检测。
5. 流式检测和分析。BeyoAIE™ Nuclear Green Probe为绿色荧光,激发波长范围为380-470nm,发射波长范围为500-600nm。推荐使用流式细胞仪BV510 (Ex/Em=405/525nm)通道进行检测,也可以使用FITC (Ex/Em=488/525nm)通道进行检测,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
注:BV510通道也称为KO525、Krome Orange、AmCyan、V500等通道。
参考文献:
1. Luo J, Xie Z, Lam JW, Cheng L, Chen H, et al. Chem Commun (Camb). 2001. (18):1740-1.
2. Wang H, Li Q, Alam P, Bai H, Bhalla V, et al. ACS Nano. 2023. 17(15):14347-14405.
3. Mei J, Leung NL, Kwok RT, Lam JW, Tang BZ. Chem Rev. 2015. 115(21):11718-940.
4. Bandyopadhyay S, Kalangi SK, Singh V, Bhosale RS. Prog Mol Biol Transl Sci. 2021. 184:1-9.
5. Khandare DG. Prog Mol Biol Transl Sci. 2021. 184:81-99.
6. Wang H, Li Q, Alam P, Bai H, Bhalla V, et al. ACS Nano. 2023. 17(15):14347-14405.
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