碧云天的BeyoFC™一步法细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒，即BeyoFC™ One-step Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit或BeyoFC™ One-step Cell Cycle and Apoptosis Assay Kit，是一种快速、高效、便捷的基于碘化丙啶特异性染色基因组DNA从而进行细胞周期和细胞凋亡流式检测的试剂盒。本试剂盒提供了仅限一步染色的即用型染色液，且染色后无须洗涤。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种非细胞膜渗透性荧光染料，不能穿过具有生物活性的细胞膜，只能通过细胞膜的破损处到达细胞核内[1, 2]，因此对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，PI可进入细胞核并与双链DNA结合，从而可以产生红色荧光，这种结合很少或几乎没有序列偏好，每4-5个碱基对插入一个PI分子。

PI的分子式为C27H34I2N4，分子质量为668.39，CAS number为25535-16-4。形成DNA复合物的最大激发光波长为535nm，最大发射光波长为617nm。PI和DNA复合物的激发光与发射光光谱参考图1。

图1.PI和DNA复合物的激发光谱与发射光谱。

细胞周期(Cell cycle)是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程，所需的时间称为细胞周期时间。细胞周期又可以分为间期(Interphase)和有丝分裂期(M phase)，细胞间期通常又划分为休眠期(G0)、DNA合成前期(G1)、DNA合成期(S)、DNA合成后期(G2)。DNA周期检测可用来反应细胞周期的各期的状况，常用于细胞增殖和肿瘤研究。

碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现Sub-G1峰，即凋亡细胞峰。使用本试剂盒分别检测正常L-929和经适当凋亡诱导的HeLa细胞的效果请参考图2。

图2.碧云天BeyoFC™一步法细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(C1055)的检测效果图。正常L-929细胞(图A)和HeLa细胞经适当凋亡诱导后(图B)，使用70%乙醇固定并经本试剂盒染色后进行流式检测。图B可见明显的凋亡细胞的Sub-G1峰。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

细胞凋亡最初被称为皱缩性细胞死亡，即细胞凋亡时形态会发生皱缩，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。

本试剂盒通常用于培养的贴壁或悬浮细胞细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

在固定后的细胞中，PI可以同时染色DNA和RNA，因此如果进行细胞周期分析，需要利用RNA酶(Ribonuclease, RNase)降解细胞内RNA，以特异性地对DNA进行染色。本产品为含PI和高效RNase的即用型溶液，使用便捷，无须稀释即可直接加入样品中进行细胞核染色。

对于细胞样品，按照每管细胞样品使用500μl染色液计算，本试剂盒小包装和大包装分别可以进行50次和200次检测。

-20ºC避光保存，至少一年有效。4ºC避光保存，至少半年有效。

本产品中含RNase，如果使用比较频繁，可置于4ºC保存，尽可能减少反复冻融。

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。