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细胞相关> 细胞标记与染色> 普通染色
产品编号: C0637-100ml
产品包装:100ml
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C0637-100ml 甲苯胺蓝染色液 100ml 68.00元
C0637-500ml 甲苯胺蓝染色液 500ml 268.00元

碧云天生产的甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue Staining Solution),又称甲苯胺蓝O染色液、TB染色液(TB Staining Solution),是一种便捷、灵敏的异染染色液,适用于细胞、血涂片、骨髓涂片以及不同动植物组织的石蜡切片和冰冻切片,常用于细胞核或肥大细胞和软骨细胞的染色[1]。

甲苯胺蓝,英文名称为Toluidine Blue O,分子式为C15H16N3SCl,分子量为305.84,CAS号为92-31-9。通常为深绿色或黑灰色粉末,溶于水,微溶于乙醇,几乎不溶于乙醚,是一种常用的人工合成染料。甲苯胺蓝属于醌亚胺类染料,含有两个发色团及两个助色团,其中发色团分别为胺基和醌型苯环。作为一种碱性染料,组织细胞的酸性物质与甲苯胺蓝结合而被染色,例如与脱氧核糖核酸和核糖核酸结合显蓝色。异染性(Metachromasy)是指在用单一染料染细胞和组织时,染色部分被染成与染剂色调不同的颜色。甲苯胺蓝的醌型苯环发色团具有明显的异染性,可分别表示为α异染性(阴性),呈蓝色,即正染性;β-异染性(弱阳性),为紫色或紫红色;γ-异染性(阳性),为红色。

发色团的异染性使甲苯胺蓝染色液成为了一种高效的异染染液,在组织学和病理学中广泛应用。本产品经过优化,对各种样品都有较好的效果。与细胞核(Nuclei)结合时显蓝色;与肥大细胞(Mast cells)细胞质内肝素和组织胺等异色性物质结合时显紫红色;对神经元的尼氏体(Nissl body)染色时呈蓝色块状;对新鲜血涂片染色时,嗜碱性粒细胞(Basophil)呈蓝紫色;染软骨细胞(Chondrocytes)时,胞质呈紫红色,细胞核深染。本产品染色后的结果见下表:

Samples Color
Nuclei Blue
Mast Cells Purplish Red
Nissl body Blue
Basophil Purple-Blue
Chondrocytes Purplish Red
Background No Color or Light Blue

本产品染色灵敏度高,背景低,着色清晰分明,用于小鼠肺组织、大鼠脑切片及小鼠全血涂片的效果图参考图1。

图1.碧云天甲苯胺蓝染色液(C0637)用于小鼠肺组织、大鼠脑切片及小鼠全血涂片的染色效果图。如图所示,用甲苯胺蓝染色液对小鼠肺组织染色,肥大细胞细胞质呈蓝紫色(红色箭头所示),细胞核呈蓝色(图A)。尼氏体(Nissl body)是分布于神经细胞胞质内的三角形或椭圆形小块状物质,能被甲苯胺蓝染色液染成紫蓝色(图B)。使用甲苯胺蓝染色液对小鼠全血涂片染色后,嗜碱性粒细胞呈紫蓝色(图C),背景无色或浅蓝色。实际染色效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

按照每个切片使用50μl甲苯胺蓝染色液来计算,本产品每100ml可进行2000次染色。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C0637-100ml 甲苯胺蓝染色液 100ml
C0637-500ml 甲苯胺蓝染色液 500ml
说明书 1份
保存条件:

室温避光保存,一年有效。

注意事项:

可能需用户自备的试剂:固定液、分化液、脱蜡剂、封片剂、乙醇、蒸馏水、免疫组化笔。脱蜡剂推荐环保脱蜡剂(二甲苯替代品) (ST975);免疫组化笔推荐Liquid Blocker Super PAP Pen (免疫组化笔) (P0139)。

初次使用本产品时建议先进行预实验。若染色过深,可用PBS (C0221A)对本染色液进行适当稀释,稀释倍数为1-10倍。

染色过程推荐浅染,通常能够分辨细胞核即可,颜色过深有可能影响细胞观察。

染色后避免用蒸馏水漂洗,可用自来水洗涤,若水pH<6.5会使其褪色。

若染色背景过深,可使用盐酸乙醇溶液分化,但盐酸乙醇溶液的浓度不能太高,否则会影响染色效果。如有需要可参考碧云天盐酸乙醇慢速分化液(C0161)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.需要用户自己准备的试剂。
a.固定液:碧云天的免疫染色固定液(P0098),或4%多聚甲醛固定液(P0099)。
b.分化液(碧云天的盐酸乙醇分化液(C0161C0163C0165)或5%的乙酸溶液或0.5%的盐酸乙醇)。
c.如果需要脱水、透明和封片处理,还需自备二甲苯或碧云天的环保脱蜡剂(二甲苯替代品) (ST975),和封片剂(如碧云天的中性树胶(镜检用长效封片剂) (C0173)或加拿大树胶(镜检用长效封片剂) (C0174)等其它封片剂),及70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、无水乙醇。
2.样品处理。
a.对于石蜡切片。
二甲苯中脱蜡5-10分钟,推荐使用环保脱蜡剂(二甲苯替代品) (ST975)替代二甲苯进行脱蜡。
换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
80%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟。
蒸馏水2分钟。
b.对于冰冻切片。
蒸馏水洗涤2分钟。
c.对于细胞涂片、爬片。
4%多聚甲醛固定液(P0099)固定10分钟。
蒸馏水洗涤2分钟。
换用新鲜的蒸馏水,再洗涤2分钟。
3.甲苯胺蓝染色液染色。
a.对于石蜡切片和冰冻切片。
(a)使用Liquid Blocker Super PAP Pen (免疫组化笔) (P0139)圈出组织,每张切片滴加50μl甲苯胺蓝染色液完全覆盖组织,染色5-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间),去除染色液,浸入自来水中冲洗去多余的染色液,约5分钟。
注:根据切片的实际大小情况,可滴加50-200μl的染色液,本使用说明以50μl为例。
(b)选做:根据不同分化液的分化时间,分化约2-30秒,自来水冲洗5分钟。
(c)将切片依次浸入70%乙醇10秒,80%乙醇10秒,90%乙醇10秒,无水乙醇10秒。二甲苯透明5分钟,换新鲜的二甲苯,再透明5分钟。
(d)滴中性树胶(镜检用长效封片剂) (C0173)或加拿大树胶(镜检用长效封片剂) (C0174)于载玻片上封片,随后即可在显微镜下观察。
b.对于细胞涂片、爬片。
(a)(选做)用PBS (C0221A)稀释甲苯胺蓝染色液,例如取稀释倍数为1-10倍。
注:稀释倍数需根据染色结果进行适当调整,首次染色也可以不进行稀释的。如果首次染色发现染色偏深,后续可以尝试适当稀释。
(b)滴加适量未稀释或稀释后的甲苯胺蓝染色液,染色2-10分钟。
(c)浸入自来水中并置于摇床洗涤5分钟。随后即可在显微镜下观察。
参考文献:
1.Bergholt NL, Lysdahl H, Lind M, Foldager CB. Cartilage. 2019. 10(3):370-374.
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