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Super-Enhanced Cell Counting Kit-8 (超强型CCK-8试剂盒) (试用装)
产品编号: C0048FT
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C0048FT Super-Enhanced Cell Counting Kit-8 (超强型CCK-8试剂盒) (试用装) 50次 .00元

碧云天研发生产的Super-Enhanced Cell Counting Kit-8,简称Super-Enhanced CCK-8试剂盒或超强型CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8用于细胞活力、增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。本试剂盒仅需0.5至1小时即可完成检测,和普通或增强型CCK-8试剂盒相比,检测速度更快、灵敏度更高、线性范围更宽。本试剂盒适用于在450nm左右测定吸光度。

WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系[1]。本试剂盒经过多方面的反复优化,通过测定formazan的吸光度就可以非常高效、线性、准确地测定细胞活力。

图1.碧云天Super-Enhanced Cell Counting Kit-8 (超强型CCK-8试剂盒) (C0048)检测原理图 (EC=Electron coupling reagent,即电子耦合试剂)。

WST-8是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤。其次,WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更加稳定,使实验结果更加稳定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽,灵敏度更高[2]。

WST-8和WST-1相比,检测灵敏度更高,更易溶解,并且更加稳定。

本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

本试剂盒经过优化,大大缩短了孵育时间,一般仅需0.5-1小时即可完成检测。大多数情况下,超强型CCK-8溶液加入细胞后仅需孵育0.5-1小时就可以获得理想的信号值,但不同的细胞类型和细胞密度等实验条件下,所需的孵育时间可能存在一定的差别。本试剂盒与增强型CCK-8试剂盒(C0041)用于HeLa细胞活性检测效果的对比图参见图2,检测试剂加入后仅需孵育0.5小时,5万个HeLa的信号强度即可以达到约3.5,信号强度是增强型CCK-8试剂盒的3倍左右。

图2.碧云天Super-Enhanced Cell Counting Kit-8 (超强型CCK-8试剂盒) (C0048)和Enhanced Cell Counting Kit-8 (增强型CCK-8试剂盒) (C0041-C0046)对不同数量HeLa细胞的检测效果对比图。不同数量的HeLa细胞100μl每孔接种于透明96孔板,培养2.5小时后每孔分别加入本产品和增强型CCK-8溶液各10μl,孵育0.5小时后测定A450,在5万个细胞内信号强度与细胞数之间呈现出良好的线性关系,细胞数量超过5万、或者孵育时间超过0.5小时后可能会不呈现线性关系,但信号值还是会继续升高的。实测数据会因具体实验条件的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的超强型CCK-8溶液,无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素,所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞,不必收集细胞,也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。

酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

本产品对细胞无明显毒性。加入超强型CCK-8溶液显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读板,使检测时间更加灵活,便于找到最佳测定时间。

碧云天同时提供一系列CellTiter-Lumi™发光法细胞活力检测试剂盒,该类试剂盒是通过化学发光法测定细胞内ATP含量从而用于超快速、超高灵敏度、高信号稳定性定量检测细胞总体活性,通常10分钟内就可以完成一个96孔板的超灵敏检测。

碧云天各种细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择,请参考http://www.beyotime.com/support/cell-proliferation.htm

按照96孔板每孔100μl细胞需要10μl超强型CCK-8溶液,本试剂盒每1ml可以进行100次检测。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C0048FT 超强型CCK-8溶液(试用装) 0.5ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃避光保存,一年有效。4℃避光保存,至少2周内有效。

注意事项:

本试剂盒反复冻融会降低检测效果。尽管经测试本试剂反复冻融3次对于其检测效果无显著影响,为取得良好的使用效果,第一次解冻后可适当分装保存。反复冻融过程中,可能会出现少量沉淀,此时宜平衡至室温,并尽量溶解。如果预计在2周内能使用完毕,解冻后也可以保存在4℃。

大多数情况下,超强型CCK-8溶液加入细胞后仅需孵育0.5-1小时就可以获得理想的信号值,但不同的细胞类型和细胞密度等实验条件下,所需的孵育时间可能存在一定的差别。

温度的高低会影响信号强度和信号稳定性,反应前细胞和超强型CCK-8溶液均需平衡至室温后再进行测定,可将超强型CCK-8溶液在不超过25℃的室温或20-25℃的水浴中融解并混匀后使用。

由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的PBS、水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。

本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测,如果待检测体系中存在较多的还原剂,需设法去除。

用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.对于96孔板,通常细胞增殖实验每孔加入100μl 2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100μl 5000个细胞,细胞的接种量根据具体的实验方案,例如培养天数、细胞增殖速度的快慢等确定,同时设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照,按照细胞培养方案培养细胞。如有需要,可加入药物处理细胞。
2.每孔加入10μl超强型CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200μl,则需加入20μl超强型CCK-8溶液,其它情况以此类推。如果担心所使用的药物会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、药物和超强型CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
3.在细胞培养箱内继续孵育0.5-3小时,对于大多数情况孵育0.5-1小时左右就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、1.5、2和3小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
注:大多数情况下,超强型CCK-8溶液加入细胞后仅需孵育0.5-1小时就可以获得理想的信号值,但不同的细胞类型和细胞密度等实验条件下,所需的孵育时间可能存在一定的差别。
4.轻轻拍动96孔板、以确保充分混匀孔内橙黄色的formazan,在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长,例如650nm,作为参考波长进行双波长测定。
常见问题:
1.超强型CCK-8溶液对细胞的毒性大小如何?
超强型CCK-8溶液对细胞的毒性非常低,通常观察不到细胞毒性。细胞在超强型CCK-8法检测后仍然可以正常生长,并可以用于其它的细胞实验。但为了避免超强型CCK-8溶液可能带来的对于后续检测的影响,除非该细胞极难获得,否则不推荐把超强型CCK-8溶液孵育过的细胞用于其它实验。
2.如果吸光度值太低,可以采取什么办法?
a.适当增加细胞数量。
b.延长加入超强型CCK-8溶液后的孵育时间。
参考文献:
1.Stoddart MJ. Methods Mol Biol. 2011. 740:21-5.
2.Ishiyama M, Miyazono Y, Sasamoto K, Ohkura Y, Ueno K. Talanta. 1997. 44(7):1299-305.
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