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Cre重组又失败啦?Cre重组酶活性检测利器了解一下!

Cre-loxP是目前被广泛应用的基因编辑系统之一,其具有简单高效、准确性好、特异性强等特点,因而受到了不少研究者的青睐。

LoxP (locus of X (cross)-over in P1)位点是一段34bp的DNA序列,其两端为两个13bp的反向重复序列(inverted repeats),中间是8bp的间隔区。Cre重组酶是来源于大肠杆菌噬菌体P1的一种类型I的拓朴异构酶(Type I topoisomerase),也是一种酪氨酸重组酶(tyrosine recombinase),它可识别34bp的loxP位点并催化loxP位点之间的DNA发生重组;重组产物根据loxP位点的位置和相对方向的不同而不同。

图1. Cre-loxP位点特异性重组示意图

理论知识看上去简单易懂,可实际操作起来却总是问题重重。
明明每一步都已经再三确认,实验操作严格遵守SOP,
可最终结果依旧和方案设想的大相径庭。

可实际情况,不是三体人已转战生物界,也不是真的“今日不宜做实验”
有可能,是你的Cre酶在偷懒哦!

碧云天全新推出LoxP-STOP-loxP-EGFP HeLa CellsLoxP-STOP-loxP-mCherry HeLa Cells两款产品,适用于检测Cre重组酶的活性,也可以用于检测Cre重组酶表达质粒或病毒的效果

检测原理:
本细胞株中含有loxP-STOP-loxP-荧光蛋白元件,在没有Cre重组酶存在的情况下,荧光蛋白的表达会被STOP元件阻断。
在细胞中转染表达Cre重组酶的质粒(例如D2608 pCMV-Cre-EGFP)、与可以直接穿透细胞膜的D0512 TAT-Cre Recombinase孵育、或直接转染Cre重组酶(例如D0509 Cre Recombinase)时,Cre重组酶可以剪切并重组loxP位点,去除两个loxP位点之间的3×SV40 poly(A)这个STOP元件,从而激活荧光蛋白的表达,随后可以通过荧光显微镜等荧光检测设备进行观察和检测。

检测原理图(以LoxP-STOP-loxP-EGFP HeLa Cells为例)

检测效果:

图3. 碧云天LoxP-STOP-loxP-EGFP HeLa Cells (C7996)功能鉴定图。

图4. 碧云天LoxP-STOP-loxP-mCherry HeLa Cells (C7998)功能鉴定图。

本细胞株
▶   所含loxP-STOP-loxP-mCherry元件通过PCR扩增和测序验证;
▶   经过支原体检测(Mycoplasma Test),检测结果为阴性;
▶   构建之前通过STR (short tandem repeats)鉴定。

同学们可以放心使用!

产品信息

产品编号 产品名称 包装 产品价格
C7996 LoxP-STOP-loxP-EGFP HeLa Cells 1支/瓶
C7998 LoxP-STOP-loxP-mCherry HeLa Cells 1支/瓶