CRISPR/Cas9基因敲除技术服务

CRISPR/Cas9是一种高效的基因编辑技术，通过sgRNA将Cas9核酸酶定向至基因组特定位点，达到DNA双链断裂和靶向基因编辑的目的。目前常用两种递送策略：慢病毒感染法和RNP直接递送法。

慢病毒感染法基于质粒构建，将Cas9和sgRNA序列构建到慢病毒载体中，包装产生慢病毒颗粒，感染目标细胞后整合到基因组中，实现稳定表达和持续编辑。进一步筛选后可获得多克隆或者单克隆敲除稳转株，适用于长期研究。RNP（核糖核蛋白）法则直接使用体外预组装的Cas9蛋白与sgRNA复合体，通过电转仪或脂质体递送入细胞，可快速切割靶基因，编辑完成后RNP被细胞降解，脱靶风险较低。该方法无需病毒包装以及基因组DNA整合，免疫原性小，实验周期短。

碧云天拥有一站式细胞培养与基因编辑平台，可提供两种基因编辑方案——慢病毒感染法和RNP直接递送法。凭借多年细胞编辑的丰富经验，为客户提供多样、全面的基因敲除服务，涵盖基因敲除质粒构建，敲除慢病毒定制，敲除稳转株构建（多克隆&单克隆）以及敲除细胞裂解液。

碧云天CRISPR/Cas9基因敲除技术服务项目表：
服务编号 服务名称 服务时间 全额预付特价 半额预付特价 零首付价 交付结果
T0401 CRISPR/Cas9基因敲除质粒（三保一） 2-3周 2866元 3200元 3400元 提供sgRNA敲除三保一套装，含3个目的基因敲除质粒+1条对照质粒，规格：2ug/条，共8ug，载体携带嘌呤抗性。
T0408 CRISPR/Cas9基因敲除慢病毒（三合一） 2-3周 3996元 4300元 4500元 提供1种敲除慢病毒混合液（含3条sgRNA序列）+对照慢病毒，病毒液3 mL，滴度>10^7 TU/mL，携带嘌呤抗性。
T0411 CRISPR/Cas9基因敲除多克隆细胞株 6-8周 7996元 8400元 8600元 敲除多克隆细胞株+对照细胞株各1管，PCR测序敲除率大于70%，细胞不带荧光，不携带嘌呤抗性。
T0418 CRISPR/Cas9基因敲除单克隆细胞株 10–12周 8996元 9500元 9800元 敲除单克隆细胞株+对照细胞株各1管，PCR测序以及WB验证，细胞不带荧光，不携带嘌呤抗性。
T0438 CRISPR/Cas9基因敲除细胞裂解液 1-2周 3597元 3800元 4000元 提供细胞沉淀裂解液，2×10^5 cells/支
T0437 其它CRISPR/Cas9相关技术服务 咨询 询价 询价 询价

图1：目的基因敲除的Western验证。筛选获得的阳性细胞传代2次后，取细胞制备蛋白样品，每孔的蛋白上样量为20μg。用抗目的蛋白X的抗体进行检测，检测Actin作为内参。标示sgGFP的为感染了靶向GFP的慢病毒后筛选获得的细胞，标示sgX的为感染了靶向目的基因X的慢病毒后筛选获得的细胞。

图2：X基因敲除影响蛋白M的磷酸化。X基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中蛋白M被特定处理诱导的磷酸化被完全抑制(A)。在通过CRISPR/Cas9技术X基因敲除的细胞中进行相同的实验，实验结果与MEF结果一致(B)。

碧云天CRISPR/Cas9基因敲除技术服务询价与订购：
  1. 请您将具体需求发送至service@beyotime.com邮箱，我们的专业技术人员将在第一时间为您提供准确报价。
  2. 若有订购意向，碧云天的技术服务人员会与您联系，并签订碧云天CRISPR/Cas9基因敲除技术服务协议书。
碧云天CRISPR/Cas9基因敲除技术服务优势：

全方位服务 涵盖基因敲除质粒构建，敲除慢病毒定制，敲除稳转株构建（多克隆&单克隆）以及敲除细胞裂解液定制。
高品质保证 积累丰富的基因编辑经验，可提供两种基因编辑方案供客户选择——慢病毒感染法和RNP直接递送法。
多重验证 可提供多重验证，不仅从核酸水平进行敲除验证，也可以在蛋白水平进行佐证。

碧云天CRISPR/Cas9基因敲除技术服务承诺：
  1. 碧云天承诺提供验证后的基因敲除产物以及对照；
  2. 提供完整实验报告，含关键步骤以及验证结果（如适用）。