问:这个是变性还是非变性的,如果样品浓度高,用裂解液稀释后还需要加这个上样缓冲液么 小云 2023-09-22 20:59:34

碧云爱答说: 2023-09-25 11:15:34

变性还原的loading buffer。如果是为了调平各组别上样体积,需要加入1×的buffer.

问:请问直接加loading收取贴壁细胞样品,会存在蛋白降解的风险吗? 小云 2023-09-24 16:48:23

碧云爱答说: 2023-09-25 10:43:30

一般用1×的loading buffer,重悬细胞再煮沸是为了裂解细胞。

问:蛋白有高分子杂带,如果考虑二聚体,可以倍量加入5xLB吗,还是添加SDS? 小云 2023-09-25 10:29:52

碧云爱答说: 2023-09-25 10:45:27

如果要打开二聚体,可以加还原剂DTT。

问:5*蛋白上样缓冲液,按比例加过后,太过于粘稠(煮沸了两次还是),BCA定量后,电泳的时候上样量多的在浓缩胶里都跑不动,上样量少的跑得快,就不一致了,有什么建议吗 小云 2023-09-25 08:29:04

碧云爱答说: 2023-09-25 10:15:50

loading 可以温浴促进完全溶解,另外与蛋白样品混合后可以煮沸10分钟。

问:上样时样品会溢到电泳液里,导致电泳液里飘着很多蓝色,飘得到处都是,有什么解决办法吗 小云 2023-09-01 17:01:35

碧云爱答说: 2023-09-04 13:26:16

loading buffer需要溶解完全并混匀后再使用。

问:上样时样品会溢到电泳液里,会影响旁边的上样孔吗 小云 2023-08-31 17:23:09

碧云爱答说: 2023-09-01 10:24:19

可能会有影响的。

问:想了解下该SDS-PAGE蛋白上样缓冲液的具体成分是什么?能否用于tricine-sds-page? 期待进一步交流! 小云 2023-08-16 19:12:26

碧云爱答说: 2023-08-17 08:46:59

Tricine的变性电泳可以使用以下的loading buffer:https://www.beyotime.com/product/P0750-2ml.htm

问:请问煮样时无沉淀,第二天拿出来上样时,吸取时发现出现沉淀是怎么回事 小云 2023-08-06 21:31:23

碧云爱答说: 2023-08-11 08:48:11

可能和样品离子浓度有关,温度变化后出现沉淀,上样前高速离心一下

问:可以放在-80度的冰箱中保存吗? 小云 2023-07-31 11:04:05

碧云爱答说: 2023-08-02 14:38:37

可以。

问:请问下需要的蛋白浓度比较高,例如54ug蛋白,1.8uLSDS够用吗?【是5:1的关系,7.2uL样品,1.8uLSDS loading】。 小云 2023-07-26 10:44:45

碧云爱答说: 2023-07-28 15:16:38

“7.2uL样品,1.8uLSDS loading”这个是符合要求的,您是要加更少的loading?