问:请问重组完成后片段和载体完成了重组,能被测序检测到,但是附近片段中间却出现了一段基因缺失是怎么回事?有没有可能跟片段太大了有关?片段3k多,载体5k多,加起来9k的大质粒,分段重组是否会好一些? 小云 2023-07-10 10:57:57

碧云爱答说: 2023-07-13 14:20:29

取了几个克隆测序的,都是这个情况吗,有没有重复实验再看看?目前不好确定原因,可以通过官网右上角QQ发一下详细实验情况。和片段大小未必有关,插入片段可以从20bp左右的小片段到10kb左右的大片段

问:接上一个问题,-20℃保存时刚拿出来有一点冻结粘稠状态,冰上解冻后是正常澄清透亮液体,会影响产品使用吗?是正常现象吗? 以及14bp的同源臂是否略短?影响重组效率 小云 2023-05-16 10:04:54

碧云爱答说: 2023-05-16 16:37:29

不影响使用。14bp稍短,不太符合要求,15-25bp

问:请问什么叫感受态细胞对重组反应体系过敏? 小云 2023-05-10 20:31:15

碧云爱答说: 2023-05-11 14:17:41

反应体系试剂直接影响感受态细胞,从而导致转化效率降低

问:-20℃保存时刚拿出来有一点冻结粘稠状态,会影响产品使用吗?是正常现象吗? 小云 2023-05-10 18:26:32

碧云爱答说: 2023-05-11 11:17:18

冰上解冻后混匀,看下溶液状态

问:运用贵公司无缝克隆试用装做克隆时,阳性克隆有很多,挑选了10个单菌落测序,但是测序结果显示连接的地方总有一些碱基对的突变,缺失,这种情况是什么原因呢?望解答! 小云 2023-02-27 04:06:52

碧云爱答说: 2023-03-01 15:01:50

请参考常见问题分析:2阳性率过低

问:请问,直接用引物(单链DNA)进行组装可以吗?组装之前要进行PCR吗? 小云 2022-11-25 19:45:10

碧云爱答说: 2022-11-30 16:14:17

如果待插入片段是非常小的片段,例如20-70bp,可以通过单链DNA(常被称为引物)的合成和退火进行制备;如果待插入片段的长度比较长不能直接进行合成,可以通过PCR扩增的方法进行制备

问:线性化载体和目的片段链接涂平板后没有阳性克隆,用试剂盒里的线性化载体和DNA fragment也没有阳性克隆,说明是试剂盒不工作了吗? 小云 2022-11-05 10:23:57

碧云爱答说: 2022-11-07 09:08:26

请您提供订单编号和重复试验条件反馈至info@beyotime.com,阳性对照做不出来有问题的

问:8500pb的载体连接2500bp的片段,发现使用该试剂盒以后,载体都是自连,请问是什么原因。 小云 2022-10-22 17:40:18

碧云爱答说: 2022-10-26 10:10:00

线性化载体通过酶切还是PCR制备的?阳性对照效果如何?优化插入片段与载体的摩尔比

问:在插入位置没有合适的酶切位点,沿3'端到5'端方向外切DNA可以在插入位置下游使用酶切后,插入入目的片段吗? 小云 2022-09-22 14:36:25

问:该试剂盒是否可以用于删除质粒上的大片段,即在删除片段的两端开口设计一对有overlap的引物 小云 2022-07-12 16:27:05

碧云爱答说: 2022-07-13 14:56:26

相当于载体做双酶切,再进行同源重组?应该可以的