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 cDNA第二链合成试剂盒

  产品编号D7172
  产品包装: 10次
  产品价格: 236.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7172 cDNA第二链合成试剂盒 10次 236.00元

      cDNA第二链合成试剂盒,Second Strand cDNA Synthesis Kit是一种在合成了cDNA第一链的基础上去除RNA-DNA杂合链中的RNA链并合成cDNA第二链,最终形成双链cDNA的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第二链合成所需的各种试剂。
      本试剂盒采用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口,此时DNA Polymerase I可以通过切口平移(nick
translation)反应催化形成cDNA第二链。
      使用本试剂盒合成的双链cDNA,可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库的构建等。
      本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应的后续反应时,足够进行20个cDNA第二链样品的合成。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7172-1 RNase H(1U/μl) 10μl
D7172-2 DNA Polymerase I(10U/μl) 30μl
D7172-3 Reaction Buffer(10X) 100μl
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项: 
      进行第二链合成时,dNTP比较适当的最终浓度约为0.2mM。如果最终浓度过低,在反应体系中需要适当补充dNTP。
      如果希望获得平末端的双链cDNA,可以用T4 DNA Polymerase(D7051)DNA末端平滑试剂盒(D7012)处理。
      酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 用反转录酶,例如BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-) (D7160/D7161/D7162)或BeyoRT™ II cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-) (D7167/D7168)合成cDNA第一条链,70℃孵育10分钟终止反应。
2. 在冰浴上向已经合成第一条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂:

Reaction Buffer (10X) 8μl
无核酸酶去离子水 68μl
RNase H (1U/μl) 1μl
DNA Polymerase I (10U/μl) 3μl

3. 按上述体系配好之后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
4. 15℃孵育2小时。(注意:反应温度不能超过15℃)
5. 加入5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀,以终止反应。
6. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA,也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。

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产品编号 产品名称 包装
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使用本产品的文献:
1. Yu K, Zhang T.
Metagenomic and metatranscriptomic analysis of microbial community structure and geneexpression of activated sludge.
PLoS One. 2012;7(5):e38183.
2. Ren H, Zhu F, Zheng C, Sun X, Wang W, Shu H.
Transcriptome analysis reveals genes related to floral development in chrysanthemum responsive tophotoperiods.
Biochem Genet. 2013 Feb;51(1-2):20-32.
3. Cai L, Yu K, Yang Y, Chen BW, Li XD, Zhang T.
Metagenomic exploration reveals high levels of microbial arsenic metabolism genes in activated sludge andcoastal sediments.
Appl Microbiol Biotechnol. 2013 Nov;97(21):9579-88.
4. Su M, Chao G, Liang M, Song J, Wu K.
Anticytoproliferative effect of Vitamin C on rat hepatic stellate cell.
Am J Transl Res. 2016 Jun 15;8(6):2820-5.
5. Kambura AK, Mwirichia RK, Kasili RW, Karanja EN, Makonde HM, Boga HI.
Bacteria and Archaea diversity within the hot springs of Lake Magadi and Little Magadi in Kenya.
BMC Microbiol. 2016 Jul 7;16(1):136.