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 BeyoRT™ cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-)

  产品编号D7166
  产品包装: 10次
  产品价格: 368.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7166 BeyoRT™ cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-) 10次 368.00元

      BeyoRT™ cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-),即BeyoRT™ First Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H minus)是一种采用了经过改造和优化的BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-),用于在总RNA、mRNA等RNA模板的基础上反转录产生
cDNA第一链的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第一链合成所需的各种试剂。
      采用本试剂盒可以合成长达13kb的cDNA第一链。在采用BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)的情况下,由于缺失了RNase H,RNA和DNA双链复合物中的RNA不会被降解,这样反转录出来的cDNA的长度就会更长,并且产量更高。
      试剂盒中提供了RNase Inhibitor,确保在反转录过程中的RNA不会被RNA酶所降解并取得较好的反转录效果。
      试剂盒还提供了Oligo(dT)18和random hexamer这两种引物,前者适合用于带有Poly(A)尾的mRNA的反转录,后者进行反转录时不需要poly(A)尾。也可以自行采用基因特异性引物进行cDNA第一链的合成。
      试剂盒中提供的Control Primer为17聚,即引物的长度为17个碱基。试剂盒中提供的Control RNA为带有3’poly(A)的
1.1kb RNA。
      使用本试剂盒合成的第一链,可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。
      本试剂盒用于体积为20微升的cDNA第一链合成反应时足够进行10个cDNA第一链样品的合成。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7166-1 BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)(200U/μl) 2000U
D7166-2 Reaction Buffer(5X) 50μl
D7166-3 RNase Inhibitor(20U/μl) 10μl
D7166-4 dNTP Mix(10mM each) 20μl
D7166-5 Oligo(dT)18 Primer(0.5μg/μl) 10μl
D7166-6 Random Hexamer Primer(0.2μg/μl) 10μl
D7166-7 Control RNA(20ng/μl) 6μl
D7166-8 Control Primer(5pmol/μl) 6μl
D7166-9 DEPC-treated Water 0.2ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项: 
      对于GC含量比较高的RNA的反转录,试剂盒的使用说明中给予了特别说明,请予以关注。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明:
1. cDNA第一条链的合成(First-strand cDNA Synthesi):
a. 参考如下表格设置反转录反应:

模板(后面4种任选一种) Total RNA 0.01-5μg
或Poly(A) RNA/mRNA 1-500ng
或Specific RNA 0.01pg-500ng
或Control RNA 2μl
引物(后面3种任选一种) Oligo(dT)18 Primer (0.5μg/μl) 1μl
Random Hexamer Primer (0.2μg/μl) 1μl
Gene specific primer 15-25pmol
DEPC-treated Water To 12μl*
70℃孵育5分钟,随后立即放置到冰浴冷却,4℃微离心,随后加入下述试剂**
Reaction Buffer (5X) 4μl
RNase Inhibitor (20U/μl) 1μl
dNTP Mix (10 mM each) 2μl
BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-) 1μl
总体积 20μl

*To 13.7μl表示加入DEPC-treated Water至最终体积为13.7μl。
70℃孵育5分钟并且随后冰浴冷却,这样可以使RNA模板的二级结构充分打开。
b. 轻轻混匀(可以用Vortex在最低速度轻轻混匀或用移液器吹打混匀),随后离心沉淀液体。
c. 如果使用Oligo(dT)18作为引物或使用基因特异性引物,在42℃孵育60分钟。如果使用random hexamer(随机六聚体)作为引物,先在25℃孵育10分钟,随后在42℃孵育60分钟。
注意:对于GC含量比较高的RNA模板的反转录反应,可以设置为45℃孵育60分钟。
d. 70℃孵育10分钟以失活BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-)并终止反转录反应。
说明:对于长片断的cDNA不推荐采用加热的方法失活BeyoRT™ M-MuLV反转录酶(RNase H-),这种操作可能会导致部分长片断DNA被剪切。
e. 反转录产物可以直接用于后续的PCR等反应,也可以-20℃冻存以备以后使用。用于后续PCR反应时,如果PCR的反应体系为50微升,则推荐使用2微升反转录产物。
2. 其他用途请自行参考M-MuLV反转录酶(RNase H-)的相关文献资料进行。
常见问题:
1. RNA反转录产物电泳观察不到。
反转录产物由于是从模板反转录而获得,而模板的量本身比较低,反转录的量通常还要少于模板量,因此通常RNA的反转录产物直接电泳观察是观察不到的。
2. 反转录产物通过PCR扩增没有特异性条带。
PCR扩增没有获得特异性条带时建议先使用actin、GAPDH等作为内参进行PCR扩增,看是否可以成功扩增。如果可以成功,则说明PCR扩增体系没有问题,此时通常是目的基因的引物设计欠佳,当然也有可能是反转录产物质量欠佳。如果内参不能被很好地扩增,则有可能PCR体系存在问题或反转录产物质量欠佳。

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D7162 BeyoRT™ II M-MLV反转录酶(RNase H-) 50KU
D7166 BeyoRT™ cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-) 10次
D7167 BeyoRT™ II cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-) 20次
D7168 BeyoRT™ II cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-) 100次
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使用本产品的文献:
1. Ren H, Zhu F, Zheng C, Sun X, Wang W, Shu H.
Transcriptome analysis reveals genes related to floral development in chrysanthemum responsive tophotoperiods.
Biochem Genet. 2013 Feb;51(1-2):20-32.
2.Bao W, Gu Y, Ta, Wang K, Xu Z.
Induction of autophagy by the MG 132 proteasome inhibitor is associated with endoplasmic reticulum stress in MCF 7 cells.
Mol Med Rep. 2016 Jan;13(1):796-804.
3. Zhang CG, Yang SD, Zhu WJ, You BG, Liu Y, Yuan ZQ, Chen WL, Li JZ, Zhou XF, Liu C , Zhang XN .
Distinctive polymer micelle designed for siRNA delivery and reversal of MDR1 gene-dependent multidrugresistance.
J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 2016 Jul 13. doi: 10.1002/jbm.b.33748. [Epub ahead of print]
4.Li D, Chen J, Ye J, Zhai X, Song J, Jiang C, Wang J, Zhang H, Jia X, Zhu F .
Anti-inflammatory effect of the six compounds isolated from Nauclea officinalis Pierrc ex Pitard, and molecular mechanism of strictosamide via suppressing the NF-κB and MAPK signaling pathway in LPS-induced RAW 264.7 macrophages.
J Ethnopharmacol. 2017 Jan 20;196:66-74.