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 Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (5U/μl)

  产品编号D7092M
  产品包装: 2.5KU
  产品价格: 878.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7092M Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (5U/μl) 2.5KU 878.00元

      Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,简称TdT,中文名称为末端脱氧核糖核酸转移酶,是一种非模板依赖的DNA聚合酶,可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3'羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短长度为3个核苷酸。有报道TdT也可以在RNA的3'羟基端加上NTP,但对于RNA的催化活性要弱于DNA。
      用途:寡核苷酸或DNA 3'羟基末端标记;DNA末端加尾(DNA tailing);5'-RACE;合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。
      来源:由大肠杆菌表达,表达基因的来源为小牛胸腺。
      活性定义:37℃ 60分钟内,催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3'羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
      酶活性检测条件:200mM potassium cacodylate (pH7.2), 1mM CoCl2,0.1mM DTT, 0.01% (v/v) Triton X-100, 10μM oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
      纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNase。
      酶储存溶液:100mM KAc (pH6.8), 2mM 2-mercaptoethanol, 0.01% (v/v) Triton X-100 and 50% (v/v) glycerol。
      Reaction Buffer (5X):0.125M Tris (pH7.2 at 25℃), 1M potassium cacodylate, 0.05% (v/v) Triton X-100, 5mM
CoCl2
      失活或抑制:70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金属离子螯合剂,较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7092M-1 TdT (5U/μl) 500μl
D7092M-2 Reaction Buffer (5X) 1.5ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项: 
      酶使用时宜放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明:
1. DNA 3'末端标记:
a. 参考如下表格设置反应体系:

待标记DNA 10 pmol of 3'-termini
Reaction Buffer(5X) 10μl
[α-32P]-ddATP, ~10TBq/mmol(3000Ci/mmol) 1.85 MBq(50μCi)
TdT(5U/μl) 4μl
补充无核酸酶的去离子水 至50μl

b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育20分钟。
d. 70℃孵育20分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。
说明:标记的效率和3'羟基末端的类型有关,3'突出末端的标记效率要显著高于3'缩进末端或平末端的标记效率。
2. DNA末端加尾(DNA Tailing):
a. 参考如下表格设置反应体系:

DNA片断 1 pmol of 3'-termini
Reaction Buffer(5X) 4μl
dATP or dTTP 130pmol(20 μCi)
或 dGTP or dCTP(四种中通常只需加入一种)
(3000 Ci/mmol)
60pmol
TdT(20U/μl) 1.5μl
补充无核酸酶的去离子水 至20μl

b. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5μl 0.5M EDTA终止反应。
说明:在上述反应条件下,每个3'羟基末端可以加上100-130个dA或dT,或20-30个dC或dG。
3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。
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产品编号 产品名称 包装
D7092S Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (5U/μl) 500U
D7092M Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (5U/μl) 2.5KU
D7093 Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (20U/μl) 500U


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