碧云天在线咨询


温馨提示:客服在线时间为工作日9:00-17:00。
其他时间请发送邮件,我们会尽快给您回复。

产品订购与售后服务:order@beyotime.com
技术咨询:info@beyotime.com

中文 |English
试剂
质粒抽提 |DNA纯化胶回收
基因组DNA抽提 |DNA电泳
DNA分子量标准 |菌种与培养
感受态制备 |T载体、质粒 |基因突变
DNA连接 |DNA标记和检测 |内切酶
修饰酶 |反转录 |PCR相关 |RNA相关
其他
|重组蛋白 |生化酶 |蛋白定量
裂解及蛋白抽提 |蛋白纯化
抗体制备 |蛋白电泳
蛋白分子量标准 |一抗 |二抗
Western |免疫沉淀 |免疫染色 |ELISA
细胞凋亡坏死 |细胞增殖 |自噬
细胞培养 |细胞组织染色 |细胞转染
细胞组分分离
EMSA相关 |报告基因相关
一氧化氮相关 |活性氧相关
炎症相关 |代谢相关
抑制剂激活剂等 |荧光探针
其他试剂盒
常用试剂
仪器
脱色摇床 |细菌培养摇床
漩涡振荡器 |混匀仪 |搅拌器
超声破碎仪 |匀浆机
其它混合破碎仪器 |移液器类
培养箱 |水浴锅 |干燥箱、烘箱
干式恒温器 |其它温控设备 |制冰机
定时器 |离心机 |氮吹仪 |旋转蒸发仪
真空泵及其它泵 |蠕动泵 |灭菌设备
洗板机 |超声波清洗器 |紫外分析仪
酶标仪 |天平 |pH计 |电导仪
氧化还原电位仪 |溶氧仪
超净工作台 |生物安全柜
耗材
离心管 |PCR耗材 |冻存管 |枪头
移液管 |巴氏吸管
离心管盒、冻存盒 |冰盒 |离心管架
枪头盒 |培养皿 |培养板 |磁性分离
封板膜 |手套等防护用品 |载玻片
盖玻片 |存储盒 |染色缸染色架
其他染色耗材 |印迹膜与洗膜盒
胶片与暗盒 |滤纸、滤膜、滤器
空柱管 |蓝盖瓶 |其他实验耗材
订货电话:
400-1683301
800-8283301
电话订货时间:
周一至周五9:00-17:00
订货邮件:
order@beyotime.com
订货QQ:
4001683301
订单下载
碧云天订单.xls
产品目录下载
碧云天产品目录.pdf
订货须知
碧云天网站 微信公众号

 SP6 RNA Polymerase

  产品编号D7062
  产品包装: 500U
  产品价格: 139.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7062 SP6 RNA Polymerase 500U 139.00元

      SP6 RNA Polymerase,即SP6 RNA聚合酶,是一种高度特异识别SP6启动子序列的DNA依赖的5'→3' RNA聚合酶。SP6
RNA Polymerase可以催化单链或双链DNA SP6启动子下游NTP的掺入,合成与SP6启动子下游的模板DNA互补的RNA。
      特点:SP6 RNA Polymerase可以识别修饰的NTP,例如生物素标记、地高辛标记、荧光素标记的NTP,可以用于各种标记RNA的合成。同时对于SP6启动子有高度的特异性。
      用途:用于RNA合成,合成的RNA可以用于或用作:杂交探针,基因组DNA序列分析,核糖核酸酶保护测定(RNase
protection assay),反义RNA合成,作为体外翻译的RNA模板,RNA剪接研究的底物,RNA二级结构和RNA-蛋白质相互作用,核酸扩增分析,siRNA、miRNA等小RNA。
      来源:由大肠杆菌表达,表达基因为嗜菌体SP6 RNA Polymerase基因。
      活性定义:37℃60分钟内,催化1nmol AMP掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
      活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),6mM MgCl2,10mM DTT,2mM spermidine,0.5mM NTP,
0.6MBq/ml[3H]-ATP,20μg/ml plasmid DNA containing the specific SP6 RNA Polymerase promoter sequence。
      纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。
      酶储存溶液:50mM Tris-HCl(pH8.0),150mM NaCl,5mM DTT,0.1mg/ml BSA,0.5mM Elugent,50% glycerol。
      Transcription Buffer(5X):200mM Tris-Cl(pH7.9 at 25℃),30mM MgCl2,50mM DTT,50mM NaCl,10mM
spermidine。
      失活或抑制:70℃加热10分钟可使SP6 RNA Polymerase失活。加入适量EDTA也可以使SP6 RNA Polymerase失活。螯合剂、浓度大于150mM的钠、钾或铵盐可以显著抑制SP6 RNA Polymerase的活性。
      SP6的consensus promotersequence如下:
      -15  -10   -5   +1  +5
      ATTTAGGTGACACTATAGAAGNG
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7062-1 SP6 RNA Polymerase(20U/μl) 500U
D7062-2 Transcription Buffer(5X) 0.2ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项: 
      酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明:
1. RNA合成:
a. DNA模板经限制性核酸内切酶酶切线性化。
b. 酚/氯仿抽提DNA,用乙醇沉淀后,溶于适量的无菌去离子水中。本步骤也可以使用适当的DNA纯化试剂盒,例如碧云天的
DNA纯化试剂盒(D0033),直接进行纯化,从而免去了酚氯仿抽提和乙醇沉淀这些步骤。
c. 参考如下表格设置反应体系:

Transcription Buffer(5X) 10μl
NTP Mixture(10mM each) 10μl
线性DNA模板 1μg
Ribonuclease Inhibitor 50U
SP6 RNA Polymerase 30U
补充经DEPC处理的去离子水 至50μl

d. 按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
e. 37℃孵育1~2个小时。
f. 加入2μl 0.5M EDTA(pH 8.0) 到反应体系中混匀或-20℃冷却终止反应。
g. 电泳分析转录产物,或通过其他适当方法鉴定转录的效率。
注意
a) 转录需在无RNA酶条件下进行。
b) 反应体系需在室温条件下配置,4℃有亚精胺(spermidine)存在时DNA可发生沉淀。
c) 按以上反应条件,每1μg 模板DNA可合成超过10μg 的RNA。
d) 如果模板DNA的线形化不太完全,会导致转录出比预期长度更长的RNA,同时使预期长度的转录本比例下降。
e) 可根据实际情况按照比例放大或缩小上述反应体系。
2. 放射标记RNA的合成:
a. DNA模板经限制性核酸内切酶酶切线性化。
b. 酚/氯仿抽提DNA,用乙醇沉淀后,溶于适量的无菌去离子水中。本步骤也可以使用适当的DNA纯化试剂盒,例如碧云天的
DNA纯化试剂盒(D0033),直接进行纯化,从而免去了酚氯仿抽提和乙醇沉淀这些步骤。
c. 参考如下表格设置反应体系:

Transcription Buffer(5X) 4μl
3 NTP Mixture(10mM each, without CTP) 1μl
100μM CTP 2.4μl
[α-32P]-CTP, ~30TBq/mmol(800Ci/mmol) 1.85MBq(50μCi)
线性DNA模板 0.2~1μg
Ribonuclease Inhibitor 20U
SP6 RNA Polymerase 20U
补充经DEPC处理的去离子水 至20μl

d. 37℃孵育1~2个小时。
e. -20℃冷却终止反应。
f. 分析和检测RNA的标记效率。
注意
a) 按以上方法合成的RNA活性一般为3-5 x108dpm/μg。
b) 上述标记反应中也可以使用[32P]、[35S]或[3H]标记的其他NTP。使用其他放射性标记的NTP时,其他的NTP需作相应调整。20μl反应体系各成分推荐使用剂量分别为:1.85MBq(50μCi)5'-[α-32P]-CTP,~30TBq/mmol(800Ci/mmol);11.1MBq(300μCi)5'-[α-35S]-UTP,>37TBq/mmol(>1000Ci/mmol);0.925MBq(25μCi)5,6-[3H]-UTP,1.1-2.2TBq/mmol(30-60Ci/mmol) 。
c) 放射性标记NTP浓度低于12μM时,全长转录本合成效率也会下降。
3. 其它用途可以参考上述用途或相关文献资料进行。

相关产品请点击如下按钮: