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 生物素随机引物DNA标记试剂盒

  产品编号D3118
  产品包装: 10次
  产品价格: 1052.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D3118 生物素随机引物DNA标记试剂盒 10次 1052.00元

      生物素随机引物DNA标记试剂盒(Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)是一种通过随机引物标记反应产生生物素标记DNA探针的试剂盒。本试剂盒标记的生物素DNA探针可以用于常规的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位杂交等。
      在Klenow酶(Klenow fragment,3'-5'exo-)催化下,通过随机引物标记反应(random prime labeling)可以把生物素标记的Biotin-11-dUTP掺入到新合成的DNA探针中,这样就可以产生生物素标记的DNA探针。在随机引物标记反应过程中,一些标记好的DNA探针可以被Klenow酶从模板DNA链上驱赶下来。这样在模板量较少的情况下,通过随机引物标记反应,最后可以产生比模板DNA量更多的生物素标记DNA探针,可多达1-15倍左右。
      本试剂盒可以用于多种DNA模板的标记,包括DNA片段、线性化的质粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本试剂盒的模板DNA片段应不小于100bp,小于100bp的DNA模板可以使用碧云天生产的生物素3'末端DNA标记试剂盒(D3106)进行DNA探针标记。
      用于本试剂盒的模板DNA的量应不少于10ng,推荐的模板用量为100ng-1μg。
      本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control DNA,可以用作检测生物素DNA探针标记效率的对照。
      生物素标记DNA可以使用碧云天生产的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(D3308)或其它适当试剂盒进行检测。
      本试剂盒可以用于10个标记反应。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D3118-1 Random Primer in Buffer(5X) 105μl
D3118-2 Klenow Fragment 11μl
D3118-3 Biotin-Labeling Mix 50μl
D3118-4 Ultrapure Water 1ml
D3118-5 Biotin-Control DNA(3ng/μl) 50μl
D3118-6 探针标记终止液 100μl
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      需自备用于探针标记效率检测的相关试剂。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 在一离心管或PCR管内加入100ng-1μg DNA模板,再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water,至总体积为34μl
说明:通常100-300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应。
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X),混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
3. 沸水浴加热5分钟,或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃,99℃加热5分钟也完全可以)。
4. 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2-3分钟。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment,混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
7. 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量,因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
8. 加入3μl探针标记终止液,混匀,终止标记反应。至此标记反应已经全部完成,标记好的DNA可以-20℃保存。
9. 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
10. 整个探针标记反应的流程参见下表:

100ng-1μgDNA模板 xμl
Ultrapure Water (34-x)μl
Random Primer in Buffer (5X) 10μl
100℃ 5分钟,立即冰浴冷却
Biotin-Labeling Mix 5μl
Klenow Fragment 1μl
总体积 50μl
37℃孵育过夜
探针标记终止液 3μl
-20℃保存
此时可用于标记效率的检测及Southern、Northern等后续检测

11. 探针标记效率的检测:可以对标记好的探针进行适当梯度稀释后,使用碧云天生产的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(D3308)或其它适当的方法进行检测。通常探针的标记效率可以参考下表:

模板DNA量 生物素标记DNA产量
孵育1小时 孵育20小时
10ng 80ng 900ng
30ng 150ng 1350ng
100ng 350ng 1650ng
300ng 750ng 2200ng
1000ng 1300ng 2600ng
3000ng 1600ng 2600ng

注意:具体的探针标记效率还和模板DNA的长度、纯度等因素有关,上表的数值仅供参考。
12. 使用本试剂盒所获得的生物素标记DNA的长度通常在数百bp左右。具体的长度因模板的长度而有所不同。例如模板DNA的长度为1kb,则生物素标记DNA产物的长度通常为100-1000bp,平均长度约为300bp左右。

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使用本产品的文献:
1. Ma Z, Sun W.
The effect of aerosol polyethylenimine/interferon-γ plasmid complexes on expression of inflammatory cytokines in mouse lung.
J Aerosol Med Pulm Drug Deliv. 2014 Apr;27(2):117-24.