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pET-Dual-N-GST-PreScission
产品编号: D2933-1μg
产品包装: 1μg
产品价格: 888.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2933-1μg pET-Dual-N-GST-PreScission 1μg 888.00元

      pET-Dual-N-GST-PreScission是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒,其中一种可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)并且GST标签后有PreScission蛋白酶的酶切位点。本质粒包含两个多克隆位点(MCS),每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点 (rbs),因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。
      在共表达两个蛋白的复合物时,通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点,宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化,可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物。本质粒的N端GST标签与第一个多克隆位点之间有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP,对应核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC,配合使用碧云天生产的PreScission Protease (P2302/P2303) 4℃酶切过夜,第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物,这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然,本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因,这样就会仅表达一个含有N端GST标签和PreScission识别位点的目的蛋白。
      pET-Dual-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
T7 transcription start-1 1
GST-taq coding sequence 71-727
PreScission Protease recognation site sequence 728-751
Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI) 752-802
T7 promoter-2 859-875
T7 transcription start-2 876
Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI) 943-1004
S Tag coding sequence 1011-1055
T7 terminator 1107-1154
f1 origin 1192-1639
bla(Ap) coding sequence 1764-2621
pBR322 origin 3382
lacI coding sequence 4576-5658
T7 promoter-1 6049-6065

      pET-Dual-N-GST-PreScission质粒(6065bp)的图谱如下:

      pET-Dual-N-GST的多克隆位点的详细图谱如下:

Lacoperator
1  GGGGAATTGT    GAGCGGATAA    CAATTCCCCT    CTAGAAATAA    TTTTGTTTAA
 CCCCTTAACA    CTCGCCTATT    GTTAAGGGGA    GATCTTTATT    AAAACAAATT
rbsGST
51  CTTTAAGAAG    GAGATATACC    ATGGGCTCCC    CTATACTAGG    TTATTGGAAA
 GAAATTCTTC    CTCTATATGG    TACCCGAGGG    GATATGATCC    AATAACCTTT
101  ATTAAGGGCC    TTGTGCAACC    CACTCGACTT    CTTTTGGAAT    ATCTTGAAGA
 TAATTCCCGG    AACACGTTGG    GTGAGCTGAA    GAAAACCTTA    TAGAACTTCT
151  AAAATATGAA    GAGCATTTGT    ATGAGCGCGA    TGAAGGTGAT    AAATGGCGAA
 TTTTATACTT    CTCGTAAACA    TACTCGCGCT    ACTTCCACTA    TTTACCGCTT
201  ACAAAAAGTT    TGAATTGGGT    TTGGAGTTTC    CCAATCTTCC    TTATTATATT
 TGTTTTTCAA    ACTTAACCCA    AACCTCAAAG    GGTTAGAAGG    AATAATATAA
251  GATGGTGATG    TTAAATTAAC    ACAGTCTATG    GCCATCATAC    GTTATATAGC
 CTACCACTAC    AATTTAATTG    TGTCAGATAC    CGGTAGTATG    CAATATATCG
301  TGACAAGCAC    AACATGTTGG    GTGGTTGTCC    AAAAGAGCGT    GCAGAGATTT
 ACTGTTCGTG    TTGTACAACC    CACCAACAGG    TTTTCTCGCA    CGTCTCTAAA
351  CAATGCTTGA    AGGAGCGGTT    TTGGATATTA    GATACGGTGT    TTCGAGAATT
 GTTACGAACT    TCCTCGCCAA    AACCTATAAT    CTATGCCACA    AAGCTCTTAA
401  GCATATAGTA    AAGACTTTGA    AACTCTCAAA    GTTGATTTTC    TTAGCAAGCT
 CGTATATCAT    TTCTGAAACT    TTGAGAGTTT    CAACTAAAAG    AATCGTTCGA
451  ACCTGAAATG    CTGAAAATGT    TCGAAGATCG    TTTATGTCAT    AAAACATATT
 TGGACTTTAC    GACTTTTACA    AGCTTCTAGC    AAATACAGTA    TTTTGTATAA
501  TAAATGGTGA    TCATGTAACC    CATCCTGACT    TCATGTTGTA    TGACGCTCTT
 ATTTACCACT    AGTACATTGG    GTAGGACTGA    AGTACAACAT    ACTGCGAGAA
551  GATGTTGTTT    TATACATGGA    CCCAATGTGC    CTGGATGCGT    TCCCAAAATT
 CTACAACAAA    ATATGTACCT    GGGTTACACG    GACCTACGCA    AGGGTTTTAA
601  AGTTTGTTTT    AAAAAACGTA    TTGAAGCTAT    CCCACAAATT    GATAAGTACT
 TCAAACAAAA    TTTTTTGCAT    AACTTCGATA    GGGTGTTTAA    CTATTCATGA
651  TGAAATCCAG    CAAGTATATA    GCATGGCCTT    TGCAGGGCTG    GCAAGCCACG
 ACTTTAGGTC    GTTCATATAT    CGTACCGGAA    ACGTCCCGAC    CGTTCGGTGC
PreScission
701  TTTGGTGGTG    GCGACCATCC    TCCAAAACTG    GAAGTTCTGT    TCCAGGGGCC
 AAACCACCAC    CGCTGGTAGG    AGGTTTTGAC    CTTCAAGACA    AGGTCCCCGG
NotI
BamHIEcoRISacIAscIPstISalIHindIII
751  CGGATCCGAA    TTCGAGCTCG    GCGCGCCTGC    AGGTCGACAA    GCTTGCGGCC
 GCCTAGGCTT    AAGCTCGAGC    CGCGCGGACG    TCCAGCTGTT    CGAACGCCGG
801  GCTAATGCTT    AAGTCGAACA    GAAAGTAATC    GTATTGTACA    CGGCCGCATA
 CGATTACGAA    TTCAGCTTGT    CTTTCATTAG    CATAACATGT    GCCGGCGTAT
T7transcription-2
T7promoter2
Lacoperator
851  ATCGAAATTA    ATACGACTCA    CTATAGGGGA    ATTGTGAGCG    GATAACAATT
 TAGCTTTAAT    TATGCTGAGT    GATATCCCCT    TAACACTCGC    CTATTGTTAA
rbsNdeIBglII
901  CCCCATCTTA    GTATATTAGT    TAAGTATAAG    AAGGAGATAT    ACATATGGCA
 GGGGTAGAAT    CATATAATCA    ATTCATATTC    TTCCTCTATA    TGTATACCGT
MunIEcoRVFseIAatIIKpnIXhoI
951  GATCTCAATT    GGATATCGGC    CGGCCACGCG    ATCGCTGACG    TCGGTACCCT
 CTAGAGTTAA    CCTATAGCCG    GCCGGTGCGC    TAGCGACTGC    AGCCATGGGA

      pET-Dual-N-GST-PreScission中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST-PreScission)包括:

AgeI AleI BbvCI BmgBI BmtI BseRI BsiWI
BsmI Bsu36I CspCI NheI NruI NsiI PmeI
PmlI PspAI RsrII SacII SexAI SfiI SmaI
SnaBI SpeI SrfI StuI TspMI XmaI

      pET-Dual-N-GST-PreScission中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST-PreScission once)包括:

XbaI T`CTAG,A 30 PspXI VC`TCGA,GB 999
NcoI C`CATG,G 69 AvaI C`YCGR,G 999
MscI TGG|CCA 281 BsoBI C`YCGR,G 999
BstBI TT`CG,AA 471 PaeR7I C`TCGA,G 999
SwaI ATTT|AAAT 501 XhoI C`TCGA,G 999
BamHI G`GATC,C 752 PacI TTA,AT`TAA 1072
EcoRI G`AATT,C 758 AvrII C`CTAG,G 1078
Eco53kI GAG|CTC 766 BlpI GC`TNA,GC 1096
SacI G,AGCT`C 764 DraIII CAC,NNN`GTG 1421
BfuAI ACCTGCNNNN`NNNN, 770 PsiI TTA|TAA 1549
BspMI ACCTGCNNNN`NNNN, 770 SspI AAT|ATT 1629
AscI GG`CGCG,CC 771 AhdI GACNN,N`NNGTC 1833
PstI C,TGCA`G 777 BsaI GGTCTCN`NNNN, 1895
SbfI CC,TGCA`GG 777 BglI GCCN,NNN`NGGC 1951
SalI G`TCGA,C 783 FspI TGC|GCA 2056
HindIII A`AGCT,T 789 AlwNI CAG,NNN`CTG 3027
NotI GC`GGCC,GC 796 BstZ17I GTA|TAC 3672
AflII C`TTAA,G 808 Tth111I GACN`N,NGTC 3697
BsrGI T`GTAC,A 835 PflFI GACN`N,NGTC 3697
NdeI CA`TA,TG 943 Bpu10I CC`TNA,GC 4334
BglII A`GATC,T 950 PpuMI RG`GWC,CY 4434
MfeI C`AATT,G 956 HpaI GTT|AAC 4801
EcoRV GAT|ATC 964 BstEII G`GTNAC,C 5121
FseI GG,CCGG`CC 969 MluI A`CGCG,T 5303
AsiSI GCG,AT`CGC 980 BstAPI GCAN,NNN`NTGC 5624
ZraI GAC|GTC 989 SphI G,CATG`C 5832
AatII G,ACGT`C 987 SgrAI CR`CCGG,YG 5984
Acc65I G`GTAC,C 993 ClaI AT`CG,AT 6028
KpnI G,GTAC`C 993 BspDI AT`CG,AT 6028

      pET-Dual-N-GST-PreScission质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
      MCS1-C Primer (853-834): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
      MCS2-N Primer (834-853): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
      T7 terminator Primer (1093-1111): 5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
      pET-Dual-N-GST-PreScission的全序列信息:D2933 pET-Dual-N-GST-PreScission.txt
      不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:
      http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm 
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2933-1μg pET-Dual-N-GST-PreScission 1μg
D2933-100μg pET-Dual-N-GST-PreScission 100μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pET-Dual-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。

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D2905-100μg pET-N-His-TEV 100μg
D2908-1μg pET-N-His-Thrombin-C-His 1μg
D2908-100μg pET-N-His-Thrombin-C-His 100μg
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D2911-100μg pET-N-GST-Thrombin-C-His 100μg
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D2916-100μg pET-N-GST-PreScission 100μg
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