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 pET-Dual-N-GST

  产品编号D2931
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2931 pET-Dual-N-GST 1μg 862.00元

      pET-Dual-N-GST是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒,其中一种蛋白可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)。本质粒包含两个多克隆位点(MCS),每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点 (rbs),因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。
      在共表达两个蛋白的复合物时,通常宜把较难表达的基因克隆到第一个多克隆位点,并在其N端引物设计时加入PreScission蛋白酶识别的八肽序列(LEVLFQGP),宜把较易表达的基因克隆到第二个多克隆位点。这样通过GST柱纯化,可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物,配合使用碧云天生产的PreScission Protease (P2302/P2303) 4℃酶切过夜,第二天收集穿柱液即可获得蛋白复合物,这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然,本质粒也可以只在第一个多克隆位点插入目的基因,这样就会仅表达一个含有N端GST标签的目的蛋白。
      pET-Dual-N-GST质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
T7 transcription start-1 1
GST-taq coding sequence 71-727
Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI) 730-780
T7 promoter-2 838-854
T7 transcription start-2 855
Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI) 922-983
S Tag coding sequence 990-1034
T7 terminator 1086-1133
f1 origin 1171-1618
bla(Ap) coding sequence 1743-2600
pBR322 origin 3361
lacI coding sequence 4555-5637
T7 promoter-1 6028-6044

      pET-Dual-N-GST质粒(6044bp)的图谱如下:

      pET-Dual-N-GST的多克隆位点的详细图谱如下:

Lacoperator
  1  GGGGAATTGT    GAGCGGATAA    CAATTCCCCT    CTAGAAATAA    TTTTGTTTAA
 CCCCTTAACA    CTCGCCTATT    GTTAAGGGGA    GATCTTTATT    AAAACAAATT
rbsGST
 51  CTTTAAGAAG    GAGATATACC    ATGGGCTCCC    CTATACTAGG    TTATTGGAAA
 GAAATTCTTC    CTCTATATGG    TACCCGAGGG    GATATGATCC    AATAACCTTT
101  ATTAAGGGCC    TTGTGCAACC    CACTCGACTT    CTTTTGGAAT    ATCTTGAAGA
 TAATTCCCGG    AACACGTTGG    GTGAGCTGAA    GAAAACCTTA    TAGAACTTCT
151  AAAATATGAA    GAGCATTTGT    ATGAGCGCGA    TGAAGGTGAT    AAATGGCGAA
 TTTTATACTT    CTCGTAAACA    TACTCGCGCT    ACTTCCACTA    TTTACCGCTT
201  ACAAAAAGTT    TGAATTGGGT    TTGGAGTTTC    CCAATCTTCC    TTATTATATT
 TGTTTTTCAA    ACTTAACCCA    AACCTCAAAG    GGTTAGAAGG    AATAATATAA
251  GATGGTGATG    TTAAATTAAC    ACAGTCTATG    GCCATCATAC    GTTATATAGC
 CTACCACTAC    AATTTAATTG    TGTCAGATAC    CGGTAGTATG    CAATATATCG
301  TGACAAGCAC    AACATGTTGG    GTGGTTGTCC    AAAAGAGCGT    GCAGAGATTT
 ACTGTTCGTG    TTGTACAACC    CACCAACAGG    TTTTCTCGCA    CGTCTCTAAA
351  CAATGCTTGA    AGGAGCGGTT    TTGGATATTA    GATACGGTGT    TTCGAGAATT
 GTTACGAACT    TCCTCGCCAA    AACCTATAAT    CTATGCCACA    AAGCTCTTAA
401  GCATATAGTA    AAGACTTTGA    AACTCTCAAA    GTTGATTTTC    TTAGCAAGCT
 CGTATATCAT    TTCTGAAACT    TTGAGAGTTT    CAACTAAAAG    AATCGTTCGA
451  ACCTGAAATG    CTGAAAATGT    TCGAAGATCG    TTTATGTCAT    AAAACATATT
 TGGACTTTAC    GACTTTTACA    AGCTTCTAGC    AAATACAGTA    TTTTGTATAA
501  TAAATGGTGA    TCATGTAACC    CATCCTGACT    TCATGTTGTA    TGACGCTCTT
 ATTTACCACT    AGTACATTGG    GTAGGACTGA    AGTACAACAT    ACTGCGAGAA
551  GATGTTGTTT    TATACATGGA    CCCAATGTGC    CTGGATGCGT    TCCCAAAATT
 CTACAACAAA    ATATGTACCT    GGGTTACACG    GACCTACGCA    AGGGTTTTAA
601  AGTTTGTTTT    AAAAAACGTA    TTGAAGCTAT    CCCACAAATT    GATAAGTACT
 TCAAACAAAA    TTTTTTGCAT    AACTTCGATA    GGGTGTTTAA    CTATTCATGA
651  TGAAATCCAG    CAAGTATATA    GCATGGCCTT    TGCAGGGCTG    GCAAGCCACG
 ACTTTAGGTC    GTTCATATAT    CGTACCGGAA    ACGTCCCGAC    CGTTCGGTGC
BamHIEcoRISacIAscI
701  TTTGGTGGTG    GCGACCATCC    TCCAAAACAG    GATCCGAATT    CGAGCTCGGC
 AAACCACCAC    CGCTGGTAGG    AGGTTTTGTC    CTAGGCTTAA    GCTCGAGCCG
NotI
PstISalIHindIII
751  GCGCCTGCAG    GTCGACAAGC    TTGCGGCCGC    ATAATGCTTA    AGTCGAACAG
 CGCGGACGTC    CAGCTGTTCG    AACGCCGGCG    TATTACGAAT    TCAGCTTGTC
T7 promoter2
801  AAAGTAATCG    TATTGTACAC    GGCCGCATAA    TCGAAATTAA    TACGACTCAC
 TTTCATTAGC    ATAACATGTG    CCGGCGTATT    AGCTTTAATT    ATGCTGAGTG
T7  transcription-2
  Lac  operator
851  TATAGGGGAA    TTGTGAGCGG    ATAACAATTC    CCCATCTTAG    TATATTAGTT
 ATATCCCCTT    AACACTCGCC    TATTGTTAAG    GGGTAGAATC    ATATAATCAA
rbsNdeIBglIIMunIEcoRVFseI
901  AAGTATAAGA    AGGAGATATA    CATATGGCAG    ATCTCAATTG    GATATCGGCC
 TTCATATTCT    TCCTCTATAT    GTATACCGTC    TAGAGTTAAC    CTATAGCCGG
AatIIKpnI XhoI
951  GGCCACGCGA    TCGCTGACGT    CGGTACCCTC    GAGTCTGGTA    AAGAAACCGC
 CCGGTGCGCT    AGCGACTGCA    GCCATGGGAG    CTCAGACCAT    TTCTTTGGCG

      pET-Dual-N-GST中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST)包括:

AgeI AleI BbvCI BmgBI BmtI BseRI BsiWI
BsmI Bsu36I CspCI NheI NruI NsiI PmeI
PmlI PspAI RsrII SacII SexAI SfiI SmaI
SnaBI SpeI SrfI StuI TspMI XmaI

      pET-Dual-N-GST中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST once)包括:

XbaI T`CTAG,A 30 AvaI C`YCGR,G 978
NcoI C`CATG,G 69 PaeR7I C`TCGA,G 978
MscI TGG|CCA 281 XhoI C`TCGA,G 978
BstBI TT`CG,AA 471 AvrII C`CTAG,G 1057
SwaI ATTT|AAAT 501 BlpI GC`TNA,GC 1075
BamHI G`GATC,C 730 DraIII CAC,NNN`GTG 1404
EcoRI G`AATT,C 736 PsiI TTA|TAA 1528
Eco53kI GAG|CTC 744 SspI AAT|ATT 1608
SacI G,AGCT`C 742 AhdI GACNN,N`NNGTC 1812
BfuAI ACCTGCNNNN`NNNN, 748 BsaI GGTCTCN`NNNN, 1874
BspMI ACCTGCNNNN`NNNN, 748 BglI GCCN,NNN`NGGC 1930
AscI GG`CGCG,CC 749 FspI TGC|GCA 2035
PstI C,TGCA`G 755 AlwNI CAG,NNN`CTG 3006
SalI G`TCGA,C 761 BstZ17I GTA|TAC 3651
HindIII A`AGCT,T 767 Tth111I GACN`N,NGTC 3676
NotI GC`GGCC,GC 774 PflFI GACN`N,NGTC 3676
AflII C`TTAA,G 787 Bpu10I CC`TNA,GC 4313
BsrGI T`GTAC,A 814 PpuMI RG`GWC,CY 4413
NdeI CA`TA,TG 922 HpaI GTT|AAC 4780
BglII A`GATC,T 929 PspoMI G`GGCC,C 5075
MunI C`AATT,G 935 ApaI G,GGCC`C 5075
EcoRV GAT|ATC 943 BstEII G`GTNAC,C 5100
FseI GG,CCGG`CC 948 MluI A`CGCG,T 5282
AsiSI GCG,AT`CGC 959 BstAPI GCAN,NNN`NTGC 5603
ZraI GAC|GTC 968 SphI G,CATG`C 5811
AatII G,ACGT`C 966 SgrAI CR`CCGG,YG 5963
Acc65I G`GTAC,C 972 BspDI AT`CG,AT 6007
KpnI G,GTAC`C 972 ClaI AT`CG,AT 6007
PspXI VC`TCGA,GB 978

      pET-Dual-N-GST质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
      MCS1-C Primer (832-813): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
      MCS2-N Primer (813-832): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
      T7 terminator Primer (1072-1090): 5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
      pET-Dual-N-GST的全序列信息:D2931 pET-Dual-N-GST.txt
      不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:
      http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2931 pET-Dual-N-GST 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pET-Dual-N-GST质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。

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D2911 pET-N-GST-Thrombin-C-His 1μg
D2916 pET-N-GST-PreScission 1μg
D2931 pET-Dual-N-GST 1μg
D2933 pET-Dual-N-GST-PreScission 1μg
P2210 BeyoGold™ His-tag Purification Resin 10ml
P2218 BeyoGold™ His-tag Purification Resin 100ml
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