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 pET-N-GST-PreScission

  产品编号D2916
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2916 pET-N-GST-PreScission 1μg 862.00元

      pET-N-GST-PreScission是一种用于表达N端含有GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)的目的蛋白的原核表达质粒。本质粒N端GST标签后含有PreScission酶切位点,可通过PreScission Protease (P2302/P2303)切除N端的GST标签。
本质粒为卡那霉素抗性。
      本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列。因此在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有GST标签的目的蛋白。
      本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP,对应的核酸序列为
CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC,因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease切除N端的GST标签。PreScission
蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。
      通常可以采用如BeyoGold™ GST-tag Purification Resin (P2251/P2253/P2255)和GST标签蛋白纯化试剂盒(P2262)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用GST抗体(AG768/AF0174)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
      pET-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
f1 origin 12-467
Kanamycin resistance ORF 563-1645
PBR 322 origin 2084
LacI coding sequence 3518-4597
T7 promoter 4988-5004
GST tag coding sequence 5076-5732
PreScission recognition site sequence 5733-5756
Multiple cloning site(BamHI-XhoI) 5757-5804
T7 Terminator 5872-5918

      pET-N-GST-PreScission质粒(5943bp)的图谱如下:

      pET-N-GST-PreScission的多克隆位点的详细图谱如下:

  XbaI       rbs    NdeI   
5026   AATTCCCCTC   TAGAAATAAT   TTTGTTTAAC  
TTTAAG AAGG  
AG ATATACAT
    
  TTAAGGGGAG ATCTTTATTA AAACAAATTG
AAATTC TTCC  
TC TATATGTA
 
  GST tag
5076 ATGATGTCCC CTATACTAGG TTATTGGAAA ATTAAGGGCC TTGTGCAACC  
TACTACAGGG GATATGATCC AATAACCTTT TAATTCCCGG AACACGTTGG  
5126 CACTCGACTT CTTTTGGAAT ATCTTGAAGA AAAATATGAA GAGCATTTGT  
GTGAGCTGAA GAAAACCTTA TAGAACTTCT TTTTATACTT CTCGTAAACA  
5176 ATGAGCGCGA TGAAGGTGAT AAATGGCGAA ACAAAAAGTT TGAATTGGGT  
TACTCGCGCT ACTTCCACTA TTTACCGCTT TGTTTTTCAA ACTTAACCCA  
5226 TTGGAGTTTC CCAATCTTCC TTATTATATT GATGGTGATG TTAAATTAAC  
AACCTCAAAG GGTTAGAAGG AATAATATAA CTACCACTAC AATTTAATTG  
5276 ACAGTCTATG GCCATCATAC GTTATATAGC TGACAAGCAC AACATGTTGG  
TGTCAGATAC CGGTAGTATG CAATATATCG ACTGTTCGTG TTGTACAACC  
5326 GTGGTTGTCC AAAAGAGCGT GCAGAGATTT CAATGCTTGA AGGAGCGGTT  
CACCAACAGG TTTTCTCGCA CGTCTCTAAA GTTACGAACT TCCTCGCCAA  
5376 TTGGATATTA GATACGGTGT TTCGAGAATT GCATATAGTA AAGACTTTGA  
AACCTATAAT CTATGCCACA AAGCTCTTAA CGTATATCAT TTCTGAAACT  
5426 AACTCTCAAA GTTGATTTTC TTAGCAAGCT ACCTGAAATG CTGAAAATGT  
TTGAGAGTTT CAACTAAAAG AATCGTTCGA TGGACTTTAC GACTTTTACA  
5476 TCGAAGATCG TTTATGTCAT AAAACATATT TAAATGGTGA TCATGTAACC  
AGCTTCTAGC AAATACAGTA TTTTGTATAA ATTTACCACT AGTACATTGG  
5526 CATCCTGACT TCATGTTGTA TGACGCTCTT GATGTTGTTT TATACATGGA  
GTAGGACTGA AGTACAACAT ACTGCGAGAA CTACAACAAA ATATGTACCT  
5576 CCCAATGTGC CTGGATGCGT TCCCAAAATT AGTTTGTTTT AAAAAACGTA  
GGGTTACACG GACCTACGCA AGGGTTTTAA TCAAACAAAA TTTTTTGCAT  
5626 TTGAAGCTAT CCCACAAATT GATAAGTACT TGAAATCCAG CAAGTATATA  
AACTTCGATA GGGTGTTTAA CTATTCATGA ACTTTAGGTC GTTCATATAT  
5676 GCATGGCCTT TGCAGGGCTG GCAAGCCACG TTTGGTGGTG GCGACCATCC  
  CGTACCGGAA ACGTCCCGAC CGTTCGGTGC AAACCACCAC CGCTGGTAGG  
    PreScission         PstI  
  ↓      BamHI HindIII EcoRI
5726
TCCAAAA CTG
GAAGTTCTGT TCCAGGGGCC CGGATCCAAG CTTCTGCAGG  
 
AGGTTTT GAC
CTTCAAGACA AGGTCCCCGG GCCTAGGTTC GAAGACGTCC  
   EcoRV   SalI  BglII   XhoI 
5776 AATTCGATAT CGTCGACAGA TCTCTCGAGT GAGATCCGGC TGCTAACAAA  
  TTAAGCTATA GCAGCTGTCT AGAGAGCTCA CTCTAGGCCG ACGATTGTTT  

      pET-N-GST-PreScission中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-PreScission)包括:

AatII Acc65I AflII AgeI AhdI AleI AscI
AvrII BaeI BbvCI BfuAI BmgBI BmtI BsaI
BseRI BsiWI BspMI BsrGI Bsu36I CspCI EagI
Eco53kI FseI KpnI MfeI NcoI NheI NotI
PacI PmeI PmlI PspXI RsrII SacI SacII
SbfI SexAI SfiI SnaBI SpeI SrfI StuI
ZraI

      pET-N-GST-PreScission中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-PreScission once)包括:

DraIII CAC,NNN`GTG 242 MluI A`CGCG,T 4242
PsiI TTA|TAA 370 BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4563
PvuI CG,AT`CG 943 SphI G,CATG`C 4771
AsiSI GCG,AT`CGC 943 SgrAI CR`CCGG,YG 4923
SmaI CCC|GGG 1067 XbaI T`CTAG,A 5034
XmaI C`CCGG,G 1067 NdeI CA`TA,TG 5074
TspMI C`CCGG,G 1069 MscI TGG|CCA 5286
NruI TCG|CGA 1286 BstBI TT`CG,AA 5476
AcuI CTGAAG(N)14,NN` 1597 SwaI ATTT|AAAT 5506
AlwNI CAG,NNN`CTG 1729 ScaI AGT|ACT 5652
BssSI C`ACGA,G 1968 BamHI G`GATC,C 5757
BstZ17I GTA|TAC 2374 HindIII A`AGCT,T 5763
Tth111I GACN`N,NGTC 2399 PstI C,TGCA`G 5769
PflFI GACN`N,NGTC 2399 EcoRI G`AATT,C 5775
PpuMI RG`GWC,CY 3136 EcoRV GAT|ATC 5783
FspI TGC|GCA 3164 SalI G`TCGA,C 5787
BglI GCCN,NNN`NGGC 3182 BglII A`GATC,T 5793
PshAI GACNN|NNGTC 3401 XhoI C`TCGA,G 5799
HpaI GTT|AAC 3740 PaeR7I C`TCGA,G 5799
BssHII G`CGCG,C 3831 BlpI GC`TNA,GC 5860
NmeAIII GCCGAG(N)19,NN` 4041 StyI C`CWWG,G 5882
BstEII G`GTNAC,C 4060

      pET-N-GST-PreScission质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
      pET-R primer (5857-5876): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
      pET-N-GST-PreScission的全序列信息:D2916 pET-N-GST-PreScission.txt。
      不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:
      http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2916 pET-N-GST-PreScission 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pET-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。

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