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 pET-N-His-Thrombin-C-His

  产品编号D2908
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2908 pET-N-His-Thrombin-C-His 1μg 862.00元

      pET-N-His-Thrombin-C-His是一种用于表达N端或C端含有His标签(His tag)的目的蛋白的原核表达质粒,也可以用于表达N端和C端都含有His标签的目的蛋白。本质粒N端His标签后有Thrombin酶切位点,可通过Thrombin蛋白酶切除N端的His标签。本质粒为卡那霉素抗性。
      本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面和后面,各有一个His标签的编码序列,每个His标签编码6个组氨酸(6X His)。在多克隆位点按照读码框插入目的基因并带上终止密码子,就可以表达仅N端带有His标签的目的蛋白,如果在NdeI和多克隆酶切位点之间按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因,这样就可以表达仅C端带有His标签的目的蛋白,如果在多克隆位点按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因,这样就可以表达N端和C端都带有His标签的目的蛋白。
      本载体在N端His标签与多克隆位点之间含有Thrombin蛋白酶识别的6肽序列LVPRGS,对应核酸序列为CTGGTGCCACGCGGTTCT,因此在目的蛋白纯化后可以用Thrombin切除N端的His标签。Thrombin蛋白酶酶切发生在六肽序列的R和G之间,因此在酶切去除His标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GS。
      通常可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
      pET-N-His-Thrombin-C-His质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
f1 origin 12-467
Kanamycin resistance ORF 563-1645
PBR 322 origin 2084
LacI coding sequence 3518-4597
T7 promoter 4988-5004
His tag coding sequence 5079-5096
Thrombin recognition site sequence 5097-5129
Multiple cloning site(BamHI-XhoI) 5130-5177
His tag coding sequence 5178-5195
T7 Terminator 5263-5309

      pET-N-His-Thrombin-C-His质粒(5334bp)的图谱如下:

      pET-N-His-Thrombin-C-His的多克隆位点的详细图谱如下:

 rbs  NdeI   His tag
5052   TAACTTTAAG  
AAGGAG ATAT  
ACATATG CAC  
CATCATCATC  
ATCAT TCTTC
ATTGAAATTC
TTCCTC TATA
TGTATAC GTG  
GTAGTAGTAG
TAGTA AGAAG
Thrombin PstI
    ↓     BamHIHindIII EcoRI
5102 TGGTCTGGTG CCACGCGGTT CTGGTATGGG   ATCCAAGCTT CTGCAGGAAT 
ACCAGACCAC GGTGCGCCAA GACCATACCC TAGGTTCGAA GACGTCCTTA
  EcoRV SalI    BglII XhoI  His  tag
5152 TCGATATCGT CGACAGATCT
CTCGAG CACC  
ACCACCACCA
CCAC TGAGAT
AGCTATAGCA GCTGTCTAGA
GAGCTC GTGG  
TGGTGGTGGT
GGTG ACTCTA

      pET-N-His-Thrombin-C-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-Thrombin-C-His)包括:

AatII Acc65I AflII AgeI AhdI AleI AscI
AvrII BaeI BbvCI BfuAI BmgBI BmtI BsaI
BseRI BsiWI BspMI BsrGI BstBI Bsu36I CspCI
DraI EagI Eco53kI FseI KpnI MfeI MscI
NcoI NheI NotI PacI PmeI PmlI PspXI
RsrII SacI SacII SbfI ScaI SexAI SfiI
SnaBI SpeI SrfI StuI SwaI ZraI

      pET-N-His-Thrombin-C-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-His-Thrombin-C-His once)包括:

DraIII CAC,NNN`GTG 242 PspOMI G`GGCC,C 4035
PsiI TTA|TAA 370 NmeAIII GCCGAG(N)19,NN` 4041
PvuI CG,AT`CG 943 BstEII G`GTNAC,C 4060
AsiSI GCG,AT`CGC 943 MluI A`CGCG,T 4242
TspMI C`CCGG,G 1067 BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4563
XmaI C`CCGG,G 1067 SphI G,CATG`C 4771
SmaI CCC|GGG 1069 SgrAI CR`CCGG,YG 4923
NruI TCG|CGA 1286 SgrAI CR`CCGG,YG 4923
AcuI CTGAAG(N)14,NN` 1597 XbaI T`CTAG,A 5034
AlwNI CAG,NNN`CTG 1729 NdeI CA`TA,TG 5074
BssSI C`ACGA,G 1968 BamHI G`GATC,C 5130
BstZ17I GTA|TAC 2374 HindIII A`AGCT,T 5136
Tth111I GACN`N,NGTC 2399 PstI C,TGCA`G 5142
PflFI GACN`N,NGTC 2399 EcoRI G`AATT,C 5148
PpuMI RG`GWC,CY 3136 EcoRV GAT|ATC 5156
FspI TGC|GCA 3164 SalI G`TCGA,C 5160
BglI GCCN,NNN`NGGC 3182 BglII A`GATC,T 5166
PshAI GACNN|NNGTC 3401 XhoI C`TCGA,G 5172
HpaI GTT|AAC 3740 PaeR7I C`TCGA,G 5172
BssHII G`CGCG,C 3831 BlpI GC`TNA,GC 5251
ApaI G,GGCC`C 4035 StyI C`CWWG,G 5273

      pET-N-His-Thrombin-C-His质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
       T7 primer (4988-5004): 5′-TAATACGACTCACTATA-3′
      pET-R primer (5248-5267): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
      pET-N-His-Thrombin-C-His的全序列信息:D2908 pET-N-His-Trombin-C-His.txt
      不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:
       http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2908 pET-N-His-Thrombin-C-His 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pET-N-His-Thrombin-C-His质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。

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