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 pET-N-His-C-His

  产品编号D2902
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2902 pET-N-His-C-His 1μg 862.00元

      pET-N-His-C-His是一种用于表达N端或C端含有His标签(His tag)的目的蛋白的原核表达质粒,也可以用于表达N端和C端都
含有His标签的目的蛋白。本质粒为卡那霉素抗性。
      本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面和后面,各有一个His标签的编码序列,每个His标签编码6个组氨酸(6X His)。在多克隆位点按照读码框插入目的基因并带上终止密码子,就可以表达仅N端带有His标签的目的蛋白,如果在NdeI和多克隆酶切位点之间按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因,这样就可以表达仅C端带有His标签的目的蛋白,如果在多克隆位点按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因,这样就可以表达N端和C端都带有His标签的目的蛋白。
      通常可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
      pET-N-His-C-His质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
f1 origin 12-467
Kanamycin resistance ORF 563-1645
PBR 322 origin 2084
LacI coding sequence 3518-4597
T7 promoter 4988-5004
His tag coding sequence 5079-5096
Multiple cloning site(BamHI-XhoI) 5097-5144
His tag coding sequence 5145-5162
T7 Terminator 5230-5276

      pET-N-His-C-His质粒(5301bp)的图谱如下:

      pET-N-His-C-His的多克隆位点的详细图谱如下:

 rbs  NdeI   His tag BamHI
5052   TAACTTTAAG  
AAGGAG ATAT  
ACATATG CAC  
CATCATCATC  
ATCAT GGATC
ATTGAAATTC
TTCCTC TATA
TGTATAC GTG  
GTAGTAGTAG
TAGTA CCTAG
       PstI
 HindIII    EcoRI EcoRV   SalI  BglII XhoI
5102 CAAGCTTCTG CAGGAATTCG ATATCGTCGA   CAGATCTCTC GAGCACCACC
GTTCGAAGAC GTCCTTAAGC TATAGCAGCT GTCTAGAGAG CTCGTGGTGG
 His tag
5152 ACCACCACCA
C TGAGATCCG
GCTGCTAACA AAGCCCGAAAG GAAGCTGAG
TGGTGGTGGT
G ACTCTAGGC
CGACGATTGT TTCGGGCTTTC CTTCGACTC

      pET-N-His-C-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-C-His)包括:

AatII Acc65I AflII AgeI AhdI AleI AscI
AvrII BaeI BbvCI BfuAI BmgBI BmtI BsaI
BseRI BsiWI BspMI BsrGI Bsu36I CspCI EagI
Eco53kI FseI KpnI MfeI NcoI NheI NotI
PacI PmeI PmlI PspXI RsrII SacI SacII
SbfI SexAI SfiI SnaBI SpeI SrfI StuI
ZraI

      pET-N-His-C-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-His-C-His once)包括:

DraIII CAC,NNN`GTG 242 PspOMI G`GGCC,C 4035
PsiI TTA|TAA 370 NmeAIII GCCGAG(N)19,NN` 4041
PvuI CG,AT`CG 943 BstEII G`GTNAC,C 4060
AsiSI GCG,AT`CGC 943 MluI A`CGCG,T 4242
TspMI C`CCGG,G 1067 BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4563
XmaI C`CCGG,G 1067 SphI G,CATG`C 4771
SmaI CCC|GGG 1069 SgrAI CR`CCGG,YG 4923
NruI TCG|CGA 1286 SgrAI CR`CCGG,YG 4923
AcuI CTGAAG(N)14,NN` 1597 XbaI T`CTAG,A 5034
AlwNI CAG,NNN`CTG 1729 NdeI CA`TA,TG 5074
BssSI C`ACGA,G 1968 BamHI G`GATC,C 5097
BstZ17I GTA|TAC 2374 HindIII A`AGCT,T 5103
Tth111I GACN`N,NGTC 2399 PstI C,TGCA`G 5109
PflFI GACN`N,NGTC 2399 EcoRI G`AATT,C 5115
PpuMI RG`GWC,CY 3136 EcoRV GAT|ATC 5123
FspI TGC|GCA 3164 SalI G`TCGA,C 5127
BglI GCCN,NNN`NGGC 3182 BglII A`GATC,T 5133
PshAI GACNN|NNGTC 3401 XhoI C`TCGA,G 5139
HpaI GTT|AAC 3740 PaeR7I C`TCGA,G 5139
BssHII G`CGCG,C 3831 BlpI GC`TNA,GC 5218
ApaI G,GGCC`C 4035 StyI C`CWWG,G 5240

      pET-N-His-C-His质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      T7 primer (4988-5004): 5′-TAATACGACTCACTATA-3′
      pET-R primer (5215-5234): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
      pET-N-His-C-His的全序列信息:D2902 pET-N-His-C-His.txt
      不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:
      http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2902 pET-N-His-C-His 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pET-N-His-C-His质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。

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D2931 pET-Dual-N-GST 1μg
D2933 pET-Dual-N-GST-PreScission 1μg
P2210 BeyoGold™ His-tag Purification Resin 10ml
P2218 BeyoGold™ His-tag Purification Resin 100ml
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