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 pCMV-N-His

  产品编号D2737
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2737 pCMV-N-His 1μg 862.00元

      pCMV-N-His是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和His tag(His标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码His标签的序列,因此可以表达出含有His标签的融合蛋白,可以方便地使用抗His的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
      pCMV-N-His质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
His tag 679-696
multiple cloning site 699-772
T7 promoter and T7 primer binding site 815-836
SV40 polyA signal 847-1230
f1 origin of ss-DNA replication 1368-1674
bla promoter 1699-1823
SV40 promoter 1843-2181
neomycin/kanamycin resistance ORF 2216-3007
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3008-3466
pUC origin 3595-4262

      pCMV-N-His质粒的图谱如下:

      pCMV-N-His的多克隆位点的详细图谱如下:

His tag XmaI
SacI M H H H H H H SmaI
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG
CCGCC
ATG CA
TCATCACCAT
CACCAT AGCC
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC
GGCGG
TAC GT
AGTAGTGGTA
GTGGTA TCGG
PstI
BamHI HindIII EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI
701 CGGGCGGATC CAAGCTTCTG CAGGAATTCG ATATCGTCGA CAGATCTCTC
GCCCGCCTAG GTTCGAAGAC GTCCTTAAGC TATAGCAGCT GTCTAGAGAG
XbaI ApaI KpnI KpnI
751 GAGTCTAGAA CTAGTGGGCC CGGTACCTTA ATTAATTAAG GTACCAGGTA
CTCAGATCTT GATCACCCGG GCCATGGAAT TAATTAATTC CATGGTCCAT

       pCMV-N-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-His)包括:

Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
Bsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I
BstE II Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I
Nru I PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I
Sca I Spl I

      pCMV-N-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-His once)包括:

Nde I CA`TA,TG 241 Pvu I CG,AT`CG 849
SnaB I TAC|GTA 347 Bcl I T`GATC,A 1003
Nhe I G`CTAG,C 598 Mun I C`AATT,G 1096
Sac I G,AGCT`C 656 Hpa I GTT|AAC 1109
Sac II CC,GC`GG 663 Mlu I A`CGCG,T 1232
BstX I CCAN,NNNN`NTGG 664 Dra III CAC,NNN`GTG 1462
Not I GC`GGCC,GC 669 Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 2121
PspA I C`CCGG,G 700 BseR I GAGGAG 16/14 2164
Xma I C`CCGG,G 700 Stu I AGG|CCT 2167
Srf I GCCC|GGGC 702 Cla I AT`CG,AT 2186
Sma I CCC|GGG 702 Kas I G`GCGC,C 2345
BamH I G`GATC,C 707 Nar I GG`CG,CC 2346
Hind III A`AGCT,T 713 Ehe I GGC|GCC 2347
Pst I C,TGCA`G 723 Bbe I G,GCGC`C 2349
EcoR I G`AATT,C 725 Msc I TGG|CCA 2428
EcoR V GAT|ATC 733 Tth111 I GACN`N,NGTC 2464
Sal I G`TCGA,C 737 BsrD I GCAATG, 8 2579
Acc I GT`MK,AC 738 Bsp1286 I G,DGCH`C 2649
Bgl II A`GATC,T 743 Rsr II CG`GWC,CG 2862
PaeR7 I C`TCGA,G 749 Rsr II CG`GWC,CG 2862
Xho I C`TCGA,G 749 BsiC I TT`CG,AA 3028
Xba I T`CTAG,A 755 BstB I TT`CG,AA 3028
Spe I A`CTAG,T 761 Bsa I GGTCTC 7/11 3335
Bsp120 I G`GGCC,C 767 HgiE II ACCNNNNNNGGT-1/13 3675
Apa I G,GGCC`C 771 ApaL I G`TGCA,C 3950

      pCMV-N-His质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
      T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
      T7 primer(815-836): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
      pCMV-N-His的全序列信息:D2737 pCMV-N-His-seq.txt
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2737 pCMV-N-His 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.pCMV-N-His质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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使用本产品的文献:
1. Shi Y, Lv G, Chu Z, Piao L, Liu X, Wang T, Jiang Y, Zhang P.
Identification of natural splice variants of SAMHD1 in virus-infected HCC.
Oncol Rep. 2014 Feb;31(2):687-92.