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 pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白)

  产品编号D2711
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2711 pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白) 1μg 862.00元

       pCMV-N-mCherry是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含mCherry (DsRed的突变体,一种非常明亮的红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个mCherry的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有mCherry标签的融合蛋白。利用mCherry的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用mCherry抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。mCherry与GFP没有序列同源性,不能使用GFP抗体检测mCherry。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
      pCMV-N-mCherry质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
mCherry 677-1384
Multiple cloning site 1385-1474
T7 promoter and T7 primer binding site 1494-1515
SV40 polyA signal 1527-1910
f1 origin of ss-DNA replication 2048-2354
bla promoter 2379-2503
SV40 promoter 2523-2861
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2896-3687
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3688-4146
pUC origin 4275-4942

       pCMV-N-mCherry质粒(4994bp)的图谱如下:

      pCMV-N-mCherry的多克隆位点的详细图谱如下:

SacI mCherry
651 GAGCTCTAGC GCTACCGGTC
GCCACC ATGG
TGAGCAAGGG
CGAGGAGGAT
CTCGAGATCG CGATGGCCAG
CGGTGG TACC
ACTCGTTCCC
GCTCCTCCTA
701 AACATGGCCA TCATCAAGGA GTTCATGCGC TTCAAGGTGC
ACATGGAGGG
TTGTACCGGT AGTAGTTCCT CAAGTACGCG AAGTTCCACG
TGTACCTCCC
751 CTCCGTGAAC GGCCACGAGT TCGAGATCGA GGGCGAGGGC
GAGGGCCGCC
GAGGCACTTG CCGGTGCTCA AGCTCTAGCT CCCGCTCCCG
CTCCCGGCGG
801 CCTACGAGGG CACCCAGACC GCCAAGCTGA AGGTGACCAA
GGGTGGCCCC
GGATGCTCCC GTGGGTCTGG CGGTTCGACT TCCACTGGTT
CCCACCGGGG
851 CTGCCCTTCG CCTGGGACAT CCTGTCCCCT CAGTTCATGT
ACGGCTCCAA
GACGGGAAGC GGACCCTGTA GGACAGGGGA GTCAAGTACA
TGCCGAGGTT
901 GGCCTACGTG AAGCACCCCG CCGACATCCC CGACTACTTG
AAGCTGTCCT
CCGGATGCAC TTCGTGGGGC GGCTGTAGGG GCTGATGAAC
TTCGACAGGA
951 TCCCCGAGGG CTTCAAGTGG GAGCGCGTGA TGAACTTCGA
GGACGGCGGC
AGGGGCTCCC GAAGTTCACC CTCGCGCACT ACTTGAAGCT
CCTGCCGCCG
1001 GTGGTGACCG TGACCCAGGA CTCCTCCCTG CAGGACGGCG
AGTTCATCTA
CACCACTGGC ACTGGGTCCT GAGGAGGGAC GTCCTGCCGC
TCAAGTAGAT
1051 CAAGGTGAAG CTGCGCGGCA CCAACTTCCC CTCCGACGGC
CCCGTAATGC
GTTCCACTTC GACGCGCCGT GGTTGAAGGG GAGGCTGCCG
GGGCATTACG
1101 AGAAGAAGAC CATGGGCTGG GAGGCCTCCT CCGAGCGGAT
GTACCCCGAG
TCTTCTTCTG GTACCCGACC CTCCGGAGGA GGCTCGCCTA
CATGGGGCTC
1151 GACGGCGCCC TGAAGGGCGA GATCAAGCAG AGGCTGAAGC
TGAAGGACGG
CTGCCGCGGG ACTTCCCGCT CTAGTTCGTC TCCGACTTCG
ACTTCCTGCC
1201 CGGCCACTAC GACGCTGAGG TCAAGACCAC CTACAAGGCC
AAGAAGCCCG
GCCGGTGATG CTGCGACTCC AGTTCTGGTG GATGTTCCGG
TTCTTCGGGC
1251 TGCAGCTGCC CGGCGCCTAC AACGTCAACA TCAAGTTGGA
CATCACCTCC
ACGTCGACGG GCCGCGGATG TTGCAGTTGT AGTTCAACCT
GTAGTGGAGG
1301 CACAACGAGG ACTACACCAT CGTGGAACAG TACGAACGCG
CCGAGGGCCG
GTGTTGCTCC TGATGTGGTA GCACCTTGTC ATGCTTGCGC
GGCTCCCGGC
BamHIHindIII
1351 CCACTCCACC GGCGGCATGG ACGAGCTGTA
CAAG GGATCC
AAGCTTCTGC
GGTGAGGTGG CCGCCGTACC TGCTCGACAT
GTTC CCTAGG
TTCGAAGACG
EcoRIEcoRVSalIBglIIXhoIXbaISpeIApaI
1401 AGGAATTCGA TATCGTCGAC AGATCTCTCG AGTCTAGAAC TAGTGGGCCC
TCCTTAAGCT ATAGCAGCTG TCTAGAGAGC TCAGATCTTG ATCACCCGGG

      pCMV-N-mCherry中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-mCherry)包括:

AclI AflII AscI AsiSI BaeI BcgI BlpI
BmgBI BsiWI BsmBI BspEI BspQI BssHII BstXI
BstZ17I EarI EcoNI FseI NotI NruI PmeI
PmlI PpuMI PshAI PspXI SacII SapI ScaI
SmaI SwaI TspMI XmaI XmnI

      pCMV-N-mCherry中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-mCherry once)包括:

NdeI CA`TA,TG 240 BglII A`GATC,T 1421
SnaBI TAC|GTA 346 PaeR7I C`TCGA,G 1427
CspCI ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 382 XhoI C`TCGA,G 1427
NheI G`CTAG,C 597 XbaI T`CTAG,A 1433
BmtI G,CTAG`C 597 SpeI A`CTAG,T 1439
SacI G,AGCT`C 651 PspOMI G`GGCC,C 1445
Eco53kI GAG|CTC 653 ApaI G,GGCC`C 1445
AfeI AGC|GCT 660 PvuI CG,AT`CG 1525
AgeI A`CCGG,T 664 BclI T`GATC,A 1681
AhdI GACNN,N`NNGTC 871 MfeI C`AATT,G 1774
SbfI CC,TGCA`GG 1032 HpaI GTT|AAC 1787
BbsI GAAGACNN`NNNN, 1112 BtsI GCAGTG,NN` 1861
PflMI CCAN,NNN`NTGG 1113 MluI A`CGCG,T 1910
BbvCI CC`TCA,GC 1215 DraIII CAC,NNN`GTG 2137
Bpu10I CC`TNA,GC 1215 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 2796
BsgI GTGCAG(N)14,NN` 1269 ClaI AT`CG,AT 2864
SgrAI CR`CCGG,YG 1358 BspDI AT`CG,AT 2864
XcmI CCANNNN,N`NNNNTGG 1362 EagI C`GGCC,G 2930
BsrGI T`GTAC,A 1377 Tth111I GACN`N,NGTC 3142
BamHI G`GATC,C 1385 PflFI GACN`N,NGTC 3142
HindIII A`AGCT,T 1391 BsrDI GCAATG,NN` 3257
EcoRI G`AATT,C 1403 RsrII CG`GWC,CG 3540
EcoRV GAT|ATC 1411 BstBI TT`CG,AA 3706
SalI G`TCGA,C 1415 BsaI GGTCTCN`NNNN, 4013
AccI GT`MK,AC 1416 PciI A`CATG,T 4942

      pCMV-N-mCherry质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      N-mCherry primer (1284-1303): 5′-AGTTGGACATCACCTCCCAC-3′
      T7 primer (1494-1515): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′
      pCMV-N-mCherry的全序列信息:D2711 pCMV-N-mCherry-seq.txt
      pCMV-N-mCherry质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。

图1. pCMV-N-mCherry质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2711 pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白) 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pCMV-N-mCherry质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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