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 pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白)

  产品编号D2705
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2705 pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白) 1μg 862.00元

      pCMV-N-DsRed是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含DsRed (Discosoma sp. red fluorescent protein,香菇珊瑚红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个DsRed的完整编码序列,并且在DsRed前面加入Kozak序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有DsRed标签的融合蛋白。利用DsRed的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用DsRed抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。DsRed与GFP没有序列同源性,不能使用GFP抗体检测DsRed。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
      pCMV-N-DsRed质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
Kozak sepuence 656-662
DsRed 663-1337
Multiple cloning site 1338-1403
T7 promoter and T7 primer binding site 1446-1468
SV40 polyA signal 1481-1863
f1 origin of ss-DNA replication 2001-2307
bla promoter 2332-2451
SV40 promoter 2476-2814
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2849-3641
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3642-4099
pUC origin 4226-4892

      pCMV-N-DsRed质粒(4947bp)的图谱如下:

      pCMV-N-DsRed的多克隆位点的详细图谱如下:

SacI Kozak DsRedM
651 GAGCTCGCCA
CC ATGGACAA
CACCGAGGAC GTCATCAAGG AGTTCATGCA
CTCGAGCGGT
GG TACCTGTT
GTGGCTCCTG CAGTAGTTCC TCAAGTACGT
701 GTTCAAGGTG CGCATGGAGG GCTCCGTGAA CGGCCACTAC TTCGAGATCG
CAAGTTCCAC GCGTACCTCC CGAGGCACTT GCCGGTGATG AAGCTCTAGC
751 AGGGCGAGGG CGAGGGCAAG CCCTACGAGG GCACCCAGAC CGCCAAGCTG
TCCCGCTCCC GCTCCCGTTC GGGATGCTCC CGTGGGTCTG GCGGTTCGAC
801 CAGGTGACCA AGGGCGGCCC CCTGCCCTTC GCCTGGGACA TCCTGTCCCC
GTCCACTGGT TCCCGCCGGG GGACGGGAAG CGGACCCTGT AGGACAGGGG
851 CCAGTTCCAG TACGGCTCCA AGGCCTACGT GAAGCACCCC GCCGACATCC
GGTCAAGGTC ATGCCGAGGT TCCGGATGCA CTTCGTGGGG CGGCTGTAGG
901 CCGACTACAT GAAGCTGTCC TTCCCCGAGG GCTTCACCTG GGAGCGCTCC
GGCTGATGTA CTTCGACAGG AAGGGGCTCC CGAAGTGGAC CCTCGCGAGG
951 ATGAACTTCG AGGACGGCGG CGTGGTGGAG GTGCAGCAGG ACTCCTCCCT
TACTTGAAGC TCCTGCCGCC GCACCACCTC CACGTCGTCC TGAGGAGGGA
1001 GCAGGACGGC ACCTTCATCT ACAAGGTGAA GTTCAAGGGC GTGAACTTCC
CGTCCTGCCG TGGAAGTAGA TGTTCCACTT CAAGTTCCCG CACTTGAAGG
1051 CCGCCGACGG CCCCGTAATG CAGAAGAAGA CTGCCGGCTG GGAGCCCTCC
GGCGGCTGCC GGGGCATTAC GTCTTCTTCT GACGGCCGAC CCTCGGGAGG
1101 ACCGAGAAGC TGTACCCCCA GGACGGCGTG CTGAAGGGCG AGATCTCCCA
TGGCTCTTCG ACATGGGGGT CCTGCCGCAC GACTTCCCGC TCTAGAGGGT
1151 CGCCCTGAAG CTGAAGGACG GCGGCCACTA CACCTGCGAC TTCAAGACCG
GCGGGACTTC GACTTCCTGC CGCCGGTGAT GTGGACGCTG AAGTTCTGGC
1201 TGTACAAGGC CAAGAAGCCC GTGCAGCTGC CCGGCAACCA CTACGTGGAC
ACATGTTCCG GTTCTTCGGG CACGTCGACG GGCCGTTGGT GATGCACCTG
1251 TCCAAGCTGG ACATCACCAA CCACAACGAG GACTACACCG TGGTGGAGCA
AGGTTCGACC TGTAGTGGTT GGTGTTGCTC CTGATGTGGC ACCACCTCGT
BamHI HindIII
1301 GTACGAGCAC GCCGAGGCCC GCCACTCCGG
CTCCCAG GGA
TCCAAGCTTC
CATGCTCGTG CGGCTCCGGG CGGTGAGGCC
GAGGGTC CCT
AGGTTCGAAG
EcoRI EcoRV SalI XhoI XbaI SpeI ApaI
1351 TGCAGGAATT CGATATCGTC GACAGATCTC TCGAGTCTAG AACTAGTGGG
ACGTCCTTAA GCTATAGCAG CTGTCTAGAG AGCTCAGATC TTGATCACCC

      pCMV-N-DsRed中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-DsRed)包括:

AclI AflII AgeI AscI AsiSI BaeI
BcgI BlpI BmgBI Bpu10I BsiWI BsmBI
BspQI BssHII BstXI BstZ17I EarI EcoNI
NruI PmeI PmlI PpuMI PshAI PspXI
SapI ScaI SgrAI SmaI SrfI SwaI
XcmI XmaI XmnI

      pCMV-N-DsRed中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-DsRed once)包括:

NdeI CA`TA,TG 240 PspOMI G`GGCC,C 1398
SnaBI TAC|GTA 346 ApaI G,GGCC`C 1398
CspCI ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 380 PvuI CG,AT`CG 1478
NheI G`CTAG,C 597 BclI T`GATC,A 1634
BmtI G,CTAG`C 597 MfeI `AATT,G 1727
SacI G,AGCT`C 651 HpaI GTT|AAC 1740
Eco53kI GAG|CTC 653 BtsI GCAGTG,NN` 1814
BstEII G`GTNAC,C 803 MluI A`CGCG,T 1863
AhdI GACNN,N`NNGTC 841 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 2749
AfeI AGC|GCT 945 ClaI AT`CG,AT 2873
SbfI CC,TGCA`GG 999 BspDI AT`CG,AT 2873
BbsI GAAGACNN`NNNN, 1083 EagI C`GGCC,G 2939
BsrGI T`GTAC,A 1201 KasI G`GCGC,C 3032
PflMI CCAN,NNN`NTGG 1241 PluTI G,GCGC`C 3032
AleI CACNN|NNGTG 1290 NarI GG`CG,CC 3033
BamHI G`GATC,C 1338 SfoI GGC|GCC 3034
HindIII A`AGCT,T 1344 MscI TGG|CCA 3115
EcoRI G`AATT,C 1356 PflFI GACN`N,NGTC 3151
EcoRV GAT|ATC 1364 Tth111I GACN`N,NGTC 3151
SalI G`TCGA,C 1368 BsrDI GCAATG,NN` 3264
AccI GT`MK,AC 1369 RsrII CG`GWC,CG 3549
PaeR7I C`TCGA,G 1380 BstBI TT`CG,AA 3715
XhoI C`TCGA,G 1380 BsaI GGTCTCN`NNNN, 4022
XbaI T`CTAG,A 1386 ApaLI G`TGCA,C 4637
SpeI A`CTAG,T 1392 PciI A`CATG,T 4951

      pCMV-N-DsRed质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      N-DsRed primer (1284-1303): 5′- TACACCGTGGTGGAGCAGTA -3′
      T7 primer (1447-1468): 5′- GTAATACGACTCACTATAGGGC -3′
      pCMV-N-DsRed的全序列信息:D2705 pCMV-N-DsRed-seq.txt
      pCMV-N-DsRed质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。


图1. pCMV-N-DsRed质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2705 pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白) 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pCMV-N-DsRed质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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