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 pCMV-N-CFP (青色荧光蛋白)

  产品编号D2703
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2703 pCMV-N-CFP (青色荧光蛋白) 1μg 862.00元

      pCMV-N-CFP是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含CFP(Cyan Fluorescent Protein, 青色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个CFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有CFP标签的融合蛋白。利用CFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达量和细胞内定位,也可以利用CFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。CFP与GFP高度相似,可以尝试用GFP抗体检测CFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
      pCMV-N-CFP质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
CFP 677-1393
Multiple cloning site 1394-1483
T7 promoter and T7 primer binding site 1503-1524
SV40 polyA signal 1536-1919
f1 origin of ss-DNA replication 2057-2363
bla promoter 2388-2512
SV40 promoter 2532-2870
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2905-3696
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3697-4155
pUC origin 4284-4951

       pCMV-N-CFP质粒(5003bp)的图谱如下:

      pCMV-N-CFP的多克隆位点的详细图谱如下:

SacICFP
651 GAGCTCTAGC GCTACCGGTC
GCCACC ATGG
TGAGCAAGGG
CGAGGAGCTG
CTCGAGATCG  CGATGGCCAG 
CGGTGG TACC
ACTCGTTCCC 
GCTCCTCGAC
701 TTCACCGGGG  TGGTGCCCAT  CCTGGTCGAG  CTGGACGGCG 
ACGTAAACGG
AAGTGGCCCC  ACCACGGGTA  GGACCAGCTC  GACCTGCCGC
TGCATTTGCC
751 CCACAGGTTC  AGCGTGTCCG  GCGAGGGCGA  GGGCGATGCC 
ACCTACGGCA
GGTGTCCAAG  TCGCACAGGC  CGCTCCCGCT CCCGCTACGG
TGGATGCCGT
801 AGCTGACCCT GAAGTTCATC  TGCACCACCG  GCAAGCTGCC 
CGTGCCCTGG
TCGACTGGGA  CTTCAAGTAG  ACGTGGTGGC CGTTCGACGG 
GCACGGGACC
851 CCCACCCTCG  TGACCACCCT  GACCTGGGGC  GTGCAGTGCT 
TCAGCCGCTA
GGGTGGGAGC ACTGGTGGGA CTGGACCCCG  CAGGTCACGA
AGTCGGCGAT
901 CCCCGACCAC  ATGAAGCAGC  ACGACTTCTT  CAAGTCCGCC 
ATGCCCGAAG
GGGGCTGGTG  TACTTCGTCG  TGCTGAAGAA GTTCAGGCGG 
TACGGGCTTC
951 GCTACGTCCA GGAGCGTACC  ATCTTCTTCA  AGGACGACGG
CAACTACAAG
GCTACGTCCA  GGAGCGTACC  ATCTTCTTCA  AGGACGACGG 
CAACTACAAG
1001 ACCCGCGCCG  AGGTGAAGTT  CGAGGGCGAC  ACCCTGGTGA 
ACCGCATCGA
TGGGCGCGGC  TCCACTTCAA  GCTCCCGCTG  TGGGACCACT 
TGGCGTAGCT
1051 GCTGAAGGGC  ATCGACTTCA  AGGAGGACGG  CAACATCCTG 
GGGCACAAGC
CGACTTCCCG  TAGCTGAAGT  TCCTCCTGCC  GTTGTAGGAC 
CCCGTGTTCG
1101 TGGAGTACAA  CTACATCAGC  CACAACGTCT  ATATCACCGC 
CGACAAGCAG
ACCTCATGTT  GATGTAGTCG  GTGTTGCAGA TATAGTGGCG 
GCTGTTCGTC
1151 AAGAACGGCA  TCAAGGCCCA  CTTCAAGATC  CGCCACAACA 
TCGAGGACGG
TTCTTGCCGT AGTTCCGGGT  GAAGTTCTAG  GCGGTGTTGT 
AGCTCCTGCC
1201 CAGCGTGCAG  CTCGCCGACC  ACTACCAGCA  GAACACCCCC 
ATCGGCGACG
GTCGCACGTC  GAGCGGCTGG  TGATGGTCGT  CTTGTGGGGG 
TAGCCGCTGC
1251 GCCCCGTGCT  GCTGCCCGAC  AACCACTACC  TGAGCACCCA 
GTCCGCCCTG
CGGGGCACGA  CGACGGGCTG  TTGGTGATGG  ACTCGTGGGT 
CAGGCGGGAC
1301 AGCAAAGACC  CCAACGAGAA  GCGCGATCAC  ATGGTCCTGC 
TGGAGTTCGT
TCGTTTCTGG  GGTTGCTCTT  CGCGCTAGTG  TACCAGGACG 
ACCTCAAGCA
BamHI HindIII
1351 GACCGCCGCC  GGGATCACTC  TCGGCATGGA  CGAGCTGTAC 
AAG GGATCCA
CTGGCGGCGG  CCCTAGTGAG  AGCCGTACCT  GCTCGACATG 
TTC CCTAGGT
PstI EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI SpeI
1401 AGCTTCTGCA GGAATTCGAT ATCGTCGACA GATCTCTCGA GTCTAGAACT
TCGAAGACGT CCTTAAGCTA TAGCAGCTGT CTAGAGAGCT CAGATCTTGA
ApaI
1451 AGTGGGCCCG GTACCTTAAT TAATTAAGGT ACC
TCACCCGGGC CATGGAATTA ATTAATTCCA TGG

      pCMV-N-CFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-CFP)包括:

AclI AflII AhdI AscI AsiSI BaeI
BbvCI BlpI BsmBI BsiWI BsmBI BspEI
BssHII BstEII BstXI BstZ17I EarI EcoNI
NotI NruI PflMI PmeI PmlI PpuMI
PspXI SacII SapI SbfI ScaI SgrAI
SwaI TspMI XcmI XmaI XmnI

      pCMV-N-CFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-CFP once)包括:

NdeI CA`TA,TG 240 ApaI G,GGCC`C 1454
SnaBI TAC|GTA 346 PvuI CG,AT`CG 1534
CspCI ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 382 BclI T`GATC,A 1690
NheI G`CTAG,C 597 MfeI C`AATT,G 1783
BmtI G,CTAG`C 597 HpaI GTT|AAC 1796
SacI G,AGCT`C 651 MluI A`CGCG,T 1919
Eco53kI GAG|CTC 653 BsaXI ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` 2080
AfeI AGC|GCT 660 DraIII CAC,NNN`GTG` 2146
AgeI A`CCGG,T 664 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 2805
BcgI ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 765 StuI AGG|CCT 2854
BsrGI T`GTAC,A 1386 ClaI AT`CG,AT 2873
BamHI G`GATC,C 1394 BspDI AT`CG,AT 2873
HindIII A`AGCT,T 1400 EagI C`GGCC,G 2939
PstI C,TGCA`G 1406 KasI G`GCGC,C 3032
EcoRI G`AATT,C 1412 PluTI G,GCGC`C 3032
EcoRV GAT|ATC 1420 NarI GG`CG,CC 3033
SalI G`TCGA,C 1424 SfoI GGC|GCC 3034
AccI GT`MK,AC 1425 MscI TGG|CCA 3115
BglII A`GATC,T 1430 PflFI GACN`N,NGTC 3151
BsoBI C`YCGR,G 1436 Tth111I GACN`N,NGTC 3151
PaeR7I C`TCGA,G 1436 BsrDI GCAATG,NN` 3264
AvaI C`YCGR,G 1436 RsrII CG`GWC,CG 3549
XhoI C`TCGA,G 1436 BstBI TT`CG,AA 3715
XbaI T`CTAG,A 1442 BsaI GGTCTCN`NNNN, 4022
SpeI A`CTAG,T 1448 ApaLI G`TGCA,C 4637
PspOMI G`GGCC,C 1454

      pCMV-N-CFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      N-CFP primer (1284-1303): 5′-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3′
      T7 primer (1503-1524): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′
      pCMV-N-CFP的全序列信息:D2703 pCMV-N-CFP-seq.txt
      pCMV-N-CFP质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。


图1. pCMV-N-CFP质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2703 pCMV-N-CFP (青色荧光蛋白) 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pCMV-N-CFP质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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