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 pCMV-C-His

  产品编号D2650
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2650 pCMV-C-His 1μg 862.00元

      pCMV-C-His是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端和His tag(His标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码His标签的序列,因此可以表达出含有His标签的融合蛋白,可以方便地使用抗His的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
      pCMV-C-His质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
multiple cloning site 680-740
c-His tag 741-758
T7 promoter and T7 primer binding site 811-832
SV40 polyA signal 844-1227
f1 origin of ss-DNA replication 1365-1669
bla promoter 1694-1818
SV40 promoter 1838-2176
neomycin/kanamycin resistance ORF 2211-3002
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3003-3461
pUC origin 3590-4257

      pCMV-C-His质粒的图谱如下:

      pCMV-C-His的多克隆位点的详细图谱如下:

XmaIPstI
SacI Small BamHI HindIII
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
His tag  
EcoRIEcoRVSalI BglII XhoI XbaI
H H H H
701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA
CATCATCACC
CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT
GTAGTAGTGG
tag
HH ApaI
751
ATCACCAT TA
A GGGCCCGGT
ACCTTAATTA ATTAAGGTAC CAGGTAAGTG
TAGTGGTA AT
T CCCGGGCCA
TGGAATTAAT TAATTCCATG GTCCATTCAC

      pCMV-C-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-His)包括:

Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
Bsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I
BstE II Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I
Nru I PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I
Sca I Spe I

      pCMV-C-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-His once)包括:

Nde I CA`TA,TG 241 Pvu I CG,AT`CG 845
SnaB I TAC|GTA 347 Bcl I T`GATC,A 999
Nhe I G`CTAG,C 598 Mun I C`AATT,G 1092
Sac I G,AGCT`C 656 Hpa I GTT|AAC 1105
Sac II CC,GC`GG 663 Mlu I A`CGCG,T 1228
BstX I CCAN,NNNN`NTGG 664 Dra III CAC,NNN`GTG 1458
Not I GC`GGCC,GC 669 Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 2115
PspA I C`CCGG,G 681 BseR I GAGGAG 16/14 2158
Xma I C`CCGG,G 681 Stu I AGG|CCT 2161
Srf I GCCC|GGGC 683 Cla I AT`CG,AT 2180
Sma I CCC|GGG 683 Kas I G`GCGC,C 2339
BamH I G`GATC,C 688 Nar I GG`CG,CC 2340
Hind III A`AGCT,T 694 Ehe I GGC|GCC 2341
Pst I C,TGCA`G 704 Bbe I G,GCGC`C 2343
EcoR I G`AATT,C 706 Msc I TGG|CCA 2422
EcoR V GAT|ATC 714 Tth111 I GACN`N,NGTC 2458
Sal I G`TCGA,C 718 BsrD I GCAATG, 8 2573
Acc I GT`MK,AC 719 Bsp1286 I G,DGCH`C 2643
Bgl II A`GATC,T 724 Rsr II CG`GWC,CG 2856
PaeR7 I C`TCGA,G 730 BsiC I TT`CG,AA 3022
Xho I C`TCGA,G 730 BstB I TT`CG,AA 3022
Xba I T`CTAG,A 736 Bsa I GGTCTC 7/11 3329
Bsp120 I G`GGCC,C 763 HgiE II ACCNNNNNNGGT-1/13 3669
Apa I G,GGCC`C 767 ApaL I G`TGCA,C 3944

      pCMV-C-His质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
      T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
      T7 primer(811-832): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
      pCMV-C-His的全序列信息: D2650-pCMV-C-His-seq.txt
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2650 pCMV-C-His 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.pCMV-C-His质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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