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 pCMV-C-HA

  产品编号D2639
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2639 pCMV-C-HA 1μg 862.00元

      pCMV-C-HA是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端与HA tag(HA标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的3'端含有一个可以编码HA标签的序列,因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白,可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
      pCMV-C-HA质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
multiple cloning site 680-740
c-HA tag 741-767
T7 promoter and T7 primer binding site 820-841
SV40 polyA signal 853-1236
f1 origin of ss-DNA replication 1374-1678
bla promoter 1703-1827
SV40 promoter 1847-2185
neomycin/kanamycin resistance ORF 2220-3011
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3012-3470
pUC origin 3599-4266

      pCMV-C-HA质粒的图谱如下:

      pCMV-C-HA的多克隆位点的详细图谱如下:

XmaIPstI
SacI Small BamHI HindIII
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
HA
EcoRIEcoRVSalI BglII XhoI XbaI
Y P Y D
701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA
TACCCATACG
CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT
ATGGGTATGC
tag
V P D Y A ApaII
751 ATGTTCCAGA
TTACGCT TAA
GGGCCCGGTA CCTTAATTAA TTAAGGTACC
TACAAGGTCT
AATGCGA
ATT
CCCGGGCCAT GGAATTAATT AATTCCATGG

      pCMV-C-HA中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-HA)包括:

Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I Bsg I
BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I BstE II
Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I Nru I
PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I Sca I
Spe I Spl I

      pCMV-C-HA中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-HA once)包括:

Nde I CA`TA,TG 241 Pvu I CG,AT`CG 854
SnaB I TAC|GTA 347 Bcl I T`GATC,A 1008
Nhe I G`CTAG,C 598 Mun I C`AATT,G 1101
Sac I G,AGCT`C 656 Hpa I GTT|AAC 1114
Sac II CC,GC`GG 663 Mlu I A`CGCG,T 1237
BstX I CCAN,NNNN`NTGG 664 Dra III CAC,NNN`GTG 1467
Not I GC`GGCC,GC 669 Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 2124
PspA I C`CCGG,G 681 BseR I GAGGAG 16/14 2167
Xma I C`CCGG,G 681 Stu I AGG|CCT 2170
Srf I GCCC|GGGC 683 Cla I AT`CG,AT 2189
Sma I CCC|GGG 683 Kas I G`GCGC,C 2348
BamH I G`GATC,C 688 Nar I GG`CG,CC 2349
Hind III A`AGCT,T 694 Ehe I GGC|GCC 2350
Pst I C,TGCA`G 704 Bbe I G,GCGC`C 2352
EcoR I G`AATT,C 706 Msc I TGG|CCA 2431
EcoR V GAT|ATC 714 Tth111 I GACN`N,NGTC 2467
Sal I G`TCGA,C 718 BsrD I GCAATG, 8 2582
Acc I GT`MK,AC 719 Bsp1286 I G,DGCH`C 2652
Bgl II A`GATC,T 724 Rsr II CG`GWC,CG 2865
PaeR7 I C`TCGA,G 730 BsiC I TT`CG,AA 3031
Xho I C`TCGA,G 730 BstB I TT`CG,AA 3031
Xba I T`CTAG,A 736 Bsa I GGTCTC 7/11 3338
Afl II C`TTAA,G 767 HgiE II ACCNNNNNNGGT-1/13 3678
Bsp120 I G`GGCC,C 772 ApaL I G`TGCA,C 3953
Apa I G,GGCC`C 776

      pCMV-C-HA质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
      T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
      T7 primer(820-841): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
      pCMV-C-HA的全序列信息: D2639 pCMV-C-HA-seq.txt
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2639 pCMV-C-HA 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.pCMV-C-HA质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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使用本产品的文献:
1. Xing J, Wang S, Lin R, Mossman KL, Zheng C.
Herpes simplex virus 1 tegument protein US11 downmodulates the RLR signaling pathway via direct interactionwith RIG-I and MDA-5.
J Virol. 2012 Apr;86(7):3528-40.
2. Xing J, Ni L, Wang S, Wang K, Lin R, Zheng C.
HSV-1 encoded tegument protein VP16 abrogates the production of interferon β by inhibiting NF-κB activationand blocking IRF-3 to recruit its coactivator CBP.
J Virol. 2013 Sep;87(17):9788-801.
3. Cai M, Li M, Wang K, Wang S, Lu Q, Yan J, Mossman KL, Lin R, Zheng C.
The herpes simplex virus 1-encoded envelope glycoprotein B activates NF-κB through the Toll-like receptor 2 andMyD88/TRAF6-dependent signaling pathway.
PLoS One. 2013;8(1):e54586.
4. Qiu Y, Ding Y, Zou L, Tan Z, Liu T, Fu X, Xu W.
Divergent roles of amino acid residues inside and outside the BB loop affect human Toll-like receptor (TLR)2/2,TLR2/1 and TLR2/6 responsiveness.
PLoS One. 2013 Apr 23;8(4):e61508. 
5. Zhang J, Wang S, Wang K, Zheng C.
Herpes simplex virus 1 DNA polymerase processivity factor UL42 inhibits TNF-α-induced NF-κB activation byinteracting with p65/RelA and p50/NF-κB1.
Med Microbiol Immunol. 2013 Aug;202(4):313-25.
6. Cui J, Duan B, Zhao X, Chen Y, Sun S, Deng W, Zhang Y, Du J, Chen Y, Gu L.
MBD3 mediates epigenetic regulation on EPAS1 promoter in cancer.
Tumour Biol. 2016 Oct;37(10):13455-67.
7. Duan B, Cui J, Sun S, Zheng J, Zhang Y, Ye B, Chen Y, Deng W, Du J, Zhu Y, Chen Y, Gu L.
EGF-stimulated activation of Rab35 regulates RUSC2-GIT2 complex formation to stabilize GIT2 duringdirectional lung cancer cell migration.
Cancer Lett. 2016 Aug 28;379(1):70-83.
8. Deng W, Wang Y, Gu L, Duan B, Cui J, Zhang Y, Chen Y, Sun S, Dong J, Du J.
MICAL1 controls cell invasive phenotype via regulating oxidative stress in breast cancer cells.
BMC Cancer. 2016 Jul 18;16:489.
9. Deng W, Gu L, Li X, Zheng J, Zhang Y, Duan B, Cui J, Dong J, Du J.
CD24 associates with EGFR and supports EGF/EGFR signaling via RhoA in gastric cancer cells.
J Transl Med. 2016 Feb 1;14:32.