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 pCMV-C-YFP (黄色荧光蛋白)

  产品编号D2630
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2630 pCMV-C-YFP (黄色荧光蛋白) 1μg 862.00元

      pCMV-C-YFP是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达C端含YFP(Yellow Fluorescent Protein, 黄色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个YFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有YFP标签的融合蛋白。利用YFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白表达水平和细胞内定位,也可以利用YFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。YFP与GFP高度相似,可尝试用GFP抗体检测YFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
      pCMV-C-YFP质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
Multiple cloning site 651-740
YFP 741-1460
T7 promoter and T7 primer binding site 1510-1531
SV40 polyAsignal 1543-1926
f1 origin of ss-DNA replication 2064-2370
bla promoter 2395-2519
SV40 promoter 2539-2877
Neomycin/kanamycin resistance ORF 2912-3703
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3704-4162
pUC origin 4291-4958

      pCMV-C-YFP质粒(5010bp)的图谱如下:

      pCMV-C-YFP的多克隆位点的详细图谱如下:

SmaI PstI
SacI SacII NotI XmaI BamHI HindIII
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI YFP
701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA
ATGGTGAGCA
CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT
TACCACTCGT
751 AGGGCGAGGA GCTGTTCACC GGGGTGGTGC CCATCCTGGT
CGAGCTGGAC
TCCCGCTCCT CGACAAGTGG CCCCACCACG GGTAGGACCA
GCTCGACCTG
801 GGCGACGTAA ACGGCCACAA GTTCAGCGTG TCCGGCGAGG
GCGAGGGCGA
CCGCTGCATT TGCCGGTGTT CAAGTCGCAC AGGCCGCTCC
CGCTCCCGCT
851 TGCCACCTAC GGCAAGCTGA CCCTGAAGTT CATCTGCACC
ACCGGCAAGC
ACGGTGGATG CCGTTCGACT GGGACTTCAA GTAGACGTGG
TGGCCGTTCG
901 TGCCCGTGCC CTGGCCCACC CTCGTGACCA CCTTCGGCTA
CGGCGTGCAG
ACGGGCACGG GACCGGGTGG GAGCACTGGT GGAAGCCGAT
GCCGCACGTC
951 TGCTTCGCCC GCTACCCCGA CCACATGCGC CAGCACGACT
TCTTCAAGTC
ACGAAGCGGG CGATGGGGCT GGTGTACGCG GTCGTGCTGA
AGAAGTTCAG
1001 CGCCATGCCC GAAGGCTACG TCCAGGAGCG CACCATCTTC
TTCAAGGACG
GCGGTACGGG CTTCCGATGC AGGTCCTCGC GTGGTAGAAG
AAGTTCCTGC
1051 ACGGCAACTA CAAGACCCGC GCCGAGGTGA AGTTCGAGGG
CGACACCCTG
TGCCGTTGAT GTTCTGGGCG CGGCTCCACT TCAAGCTCCC
GCTGTGGGAC
1101 GTGAACCGCA TCGAGCTGAA GGGCATCGAC TTCAAGGAGG
ACGGCAACAT
CACTTGGCGT AGCTCGACTT CCCGTAGCTG AAGTTCCTCC
TGCCGTTGTA
1151 CCTGGGGCAC AAGCTGGAGT ACAACTACAA CAGCCACAAC
GTCTATATCA
GGACCCCGTG TTCGACCTCA TGTTGATGTT GTCGGTGTTG
CAGATATAGT
1201 TGGCCGACAA GCAGAAGAAC GGCATCAAGG TGAACTTCAA
GATCCGCCAC
ACCGGCTGTT CGTCTTCTTG CCGTAGTTCC ACTTGAAGTT
CTAGGCGGTG
1251 AACATCGAGG ACGGCAGCGT GCAGCTCGCC GACCACTACC
AGCAGAACAC
TTGTAGCTCC TGCCGTCGCA CGTCGAGCGG CTGGTGATGG
TCGTCTTGTG
1301 CCCCATCGGC GACGGCCCCG TGCTGCTGCC CGACAACCAC
TACCTGAGCT
GGGGTAGCCG CTGCCGGGGC ACGACGACGG GCTGTTGGTG
ATGGACTCGA
1351 ACCAGTCCGC CCTGAGCAAA GACCCCAACG AGAAGCGCGA
TCACATGGTC
TGGTCAGGCG GGACTCGTTT CTGGGGTTGC TCTTCGCGCT
AGTGTACCAG
1401 CTGCTGGAGT TCGTGACCGC CGCCGGGATC ACTCTCGGCA
TGGACGAGCT
GACGACCTCA AGCACTGGCG GCGGCCCTAG TGAGAGCCGT
ACCTGCTCGA
ApaI
1451
GTACAAGTAA
GGGCCCGGTA CCTTAATTAA TTAAGGTACC AGGTAAGTGT
CATGTTCATT
CCCGGGCCAT GGAATTAATT AATTCCATGG TCCATTCACA

      pCMV-C-YFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-YFP)包括:

AclI AfeI AflII AgeI AhdI AscI AsiSI
BaeI BbsI BbvCI BlpI BmgBI BsiWI BsmBI
BspEI BspQI BssHII BstEII BstZ17I EarI EcoNI
FseI NruI PflMI PmeI PmlI PpuMI PshAI
PspXI SapI SbfI ScaI SgrAI SpeI SwaI
XcmI XmnI

      pCMV-C-YFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-YFP once)包括:

NdeI CA`TA,TG 240 PspOMI G`GGCC,C 1461
SnaBI TAC|GTA 346 ApaI G,GGCC`C 1461
CspCI ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 380 PvuI CG,AT`CG 1541
NheI G`CTAG,C 597 BclI T`GATC,A 1697
BmtI G,CTAG`C 597 MfeI C`AATT,G 1790
SacI G,AGCT`C 651 HpaI GTT|AAC 1803
Eco53kI GAG|CTC 653 MluI A`CGCG,T 1926
BstXI CCAN,NNNN`NTGG 659 BsaXI ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` 2087
SacII CC,GC`GG 660 DraIII CAC,NNN`GTG 2153
NotI GC`GGCC,GC 668 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 2812
TspMI C`CCGG,G 680 StuI AGG|CCT 2861
XmaI C`CCGG,G 680 ClaI AT`CG,AT 2880
SmaI CCC|GGG 682 BspDI AT`CG,AT 2880
BamHI G`GATC,C 687 KasI G`GCGC,C 3039
HindIII A`AGCT,T 693 NarI GG`CG,CC 3040
PstI C,TGCA`G 699 SfoI GGC|GCC 3041
EcoRI G`AATT,C 705 PluTI G,GCGC`C 3039
EcoRV GAT|ATC 713 MscI TGG|CCA 3122
SalI G`TCGA,C 717 Tth111I GACN`N,NGTC 3158
AccI GT`MK,AC 718 PflFI GACN`N,NGTC 3158
BglII A`GATC,T 723 BsrDI GCAATG,NN` 3271
XhoI C`TCGA,G 729 RsrII CG`GWC,CG 3556
PaeR7I C`TCGA,G 729 BstBI TT`CG,AA 3722
XbaI T`CTAG,A 735 BsaI GGTCTCN`NNNN, 4029
BcgI ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 829 ApaLI G`TGCA,C 4644
BsrGI T`GTAC,A 1450 PciI A`CATG,T 4958

      pCMV-C-YFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      T3 primer (620-639): 5′-AATTAACCCTCACTAAAGGG-3′
      C-YFP primer (852-873): 5′- GGGTCAGCTTGCCGTAGGTGGC -3′
      pCMV-C-YFP的全序列信息:D2630 pCMV-C-YFP-seq.txt
      pCMV-C-YFP质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。


图1. pCMV-C-YFP质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2630 pCMV-C-YFP (黄色荧光蛋白) 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。 抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pCMV-C-YFP质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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