产品简介:
pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片断的重组克隆。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体,载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样,pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对,在连接酶的催化下,就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中,形成含有目的片断的重组载体。
pUCm-T载体的图谱如下:

pUCm-T载体的多克隆位点的详细图谱如下:

pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T vector)包括:
AcaI, AccIII, AceII, Afa24RI, AgeI, AmaI, AosIII, ApaI, ApeI, AscI, Asp78I, AtuCI,
AvaIII, AvrII, BaeI, BalI, Bbf7411I, BbsI, BclI, Bco102II, BfrBI, BlpI, BmgI, BplI,
Bpu10I, Bpu1268I, BsaAI, BsaFI, BsaKI, BsaMI, BscEI, BscJI, Bse59I, BseRI, BsgI, BsiWI,
BsmFI, BsmGI, Bsp120I, Bsp87I, BspGI, BspLU11III, BsrGI, BssHII, Bst1107I, Bst29I,
Bst98I, BstEII, BstXI, Bsu36I, CfrAI, CspI, Csp45I, DraIII, DrdII, EciAI, EciEI,
Eco47III, Eco72I, EcoAI, EcoBI, EcoDI, EcoDXXI, EcoDR3, EcoEI, EcoNI, EcoR124I,
EcoR124II, EcoRD3, FinI, FseI, HpaI, MluI, Mlu1106I, Mlu113I, Msp20I, MunI, NaeI,
NgoMI, NheI, NruI, NsiI, PacI, PauI, PfuI, PmeI, Ppu10I, Ppu6I, PpuMI, PshAI, RleAI,
SacII, SanDI, SfiI, SgfI, SgrAI, SmaI, SnaI, SnaBI, SpeI, SrfI, Sse8647I, StuI, StySQ,
SwaI, Uba1220I, Uba1221I, Uba1382I, UbaDI, Van91I, XmaI。
pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T vector once)包括:
497AacI, 2708AatII, 517AccI, 408Acc65I, 503AcrI, 515Acs1371I, 893AflIII, 2263AflIV,
503AhyAI, 1309AlwNI, 186ApaBI, 396ApoI, 443Apu16I, 533Asp52I, 527Asp5HI, 455AteI,
504AvaI, 498BamHI, 406BanII, 239BbeI, 234BbeAI, 534BbrI, 2291BcgI, 2325BcgI, 492Bco63I,
492BglII, 1852Bli49I, 1847BsaI, 756BsaXI, 497BsaBI, 117BsbI, 449BshLI, 462BsoDI,
401Bsp117I, 407BspJ106I, 893BspLU11I, 529BspMI, 455Bst224I, 1866Cfr10I, 515ChuII,
445ClaI, 456DsaI, 515DsaVI, 401Ecl137I, 1786EclHKI, 463Eco52I, 395Eco82I, 397EcoDR2,
404EcoICRI, 2443EcoKI, 2762EcoO109I, 396EcoRI, 452EcoRV, 541EcoprrI, 237EheI, 50Esp16I,
45Esp3I, 474FsuI, 518HincII, 534HindIII, 235KasI, 412KpnI, 236NarI, 456NcoI,
508Nli387/7I, 463NotI, 1801Pfl1108I, 2703Ppu1253I, 2765PssI, 406SacI, 516SalI, 777SapI,
2266ScaI, 506SciI, 476SexAI, 532SphI, 526Sse8387I, 2590SspI, 456StyI, 158StySJ,
2443StySPI, 2380SynII, 478Tth111I, 1490Tth111II, 2760Uba1326, 510XbaI, 484XcmI,
504XhoI, 2385XmnI。
pUCm-T载体是在pUC19载体的基础上改造而成,除多克隆位点外,其余序列同pUC19(GenBank Accession Number M77789)。
少量自连的载体产生的克隆会由于编码了LacZ基因,在IPTG/X-Gal平板上呈现蓝色克隆。大部分重组的载体,由于插入片断破坏了LacZ基因,因而在IPTG/X-Gal平板上呈现白色克隆。这样就可以通过蓝白斑非常容易地筛选出重组克隆。
对于重组的质粒可以使用载体多克隆位点上的两个PstI酶切位点进行PstI单酶切鉴定,也可以使用廉价且高效的EcoRI、BamHI、XbaI、HindIII等内切酶进行双酶切鉴定。
构建完成的质粒可以通过质粒上的正反两个M13引物位点进行测序或通过T7 promoter上的T7引物位点进行测序。
构建完成的质粒可以利用T7 RNA polymerase promoter进行体外转录,用于探针标记等。
一个包装的本载体共可以进行20次连接反应。
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D2006 |
pUCm-T载体 |
20μl |
— |
说明书 |
1份 |
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
DNA聚合酶是否可以在PCR产物3’端加A需参考该DNA聚合酶的说明。对于PCR产物为平端的情况,不适合用于T载体的连接反应。对于平端的PCR产物可以先进行在3’端加A的反应,再用T载体进行克隆。
进行PCR产物克隆时需自备连接、转化等相关试剂、试剂盒。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。