溶酶体β-半乳糖苷酶染色试剂盒

 产品编号: C0605
 产品包装: >100次
 产品价格: 438.00元
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产品简介

产品简介:
    溶酶体β-半乳糖苷酶染色试剂盒(Lysosomal β-Galactosidase Staining Kit)是一种对溶酶体中酸性β-半乳糖苷酶进行染色检测的试剂盒,常用作细胞衰老检测时的对照。在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织中溶酶体酸性β-半乳糖苷酶的活力水平情况。本试剂盒可以用于培养细胞的检测,也可以用于组织切片的检测。
    绝大多数正常细胞都可以检测到较高水平的溶酶体β-半乳糖苷酶活性水平。可以用作细胞衰老β-半乳糖苷酶染色时的参考染色。细胞衰老特异的β-半乳糖苷酶仅在衰老时表达,而溶酶体β-半乳糖苷酶几乎在任何情况下都表达。
    碧云天生产的溶酶体β-半乳糖苷酶染色试剂盒,以X-Gal为底物,在溶酶体酸性β-半乳糖苷酶的催化下会生成深蓝色产物。从而在光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
    本试剂盒仅染色溶酶体酸性β-半乳糖苷酶,不会染色衰老特异性的β-半乳糖苷酶,也不会染色外源转染表达的用于报告基因的β-半乳糖苷酶(大肠杆菌的β-半乳糖苷酶)。
    如果使用6孔板检测,足够测定100个样品;使用24孔板测定,足够测定400个样品;使用96孔板测定,足够测定1000个样品。对于组织切片或组织块,可以检测的样品数量视样品的大小而定。对于普通的切片也至少足够检测100个样品。
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

C0605-1

β-半乳糖苷酶染色固定液

100ml

C0605-2

X-Gal溶液

5ml

C0605-3

β-半乳糖苷酶染色液A

1ml

C0605-4

β-半乳糖苷酶染色液B

1ml

C0605-5

β-半乳糖苷酶染色液C

100ml

说明书

1份

保存条件:
    -20℃保存,一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项:
    β-半乳糖苷酶染色固定液有一定的腐蚀性和毒性,操作时请注意防护。
    β-半乳糖苷酶染色液B在刚刚溶解后会观察到有沉淀,属正常现象,充分混匀或Vortex后,沉淀会全部溶解。作为常规,试剂使用前必须确保沉淀全部溶解,并且混匀。
    配制染色工作液时需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器,不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器。但染色时可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中进行,例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。
    需自备PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 对于贴壁细胞:
   a. 对于6孔板中培养的细胞,吸除细胞培养液,用PBS或HBSS洗涤1次,加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固
      定液,室温固定15分钟。对于其它类型的培养板,固定液及后续溶液的用量参照此比例进行操作。
   b. 吸除细胞固定液,用PBS或HBSS洗涤细胞3次,每次3分钟。
   c. 吸除PBS或HBSS,每孔加入1毫升染色工作液。使用聚丙烯(polypropylene)容器,不能使用聚苯乙
      烯(polystyrene)容器配制染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。
     表1. 染色工作液的配制方法。

β-半乳糖苷酶染色液A

10μl

β-半乳糖苷酶染色液B

10μl

β-半乳糖苷酶染色液C

930μl

X-Gal溶液

50μl

      说明:对于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的简单的判定方法是:聚丙烯容器可以高温高压灭菌;而聚
      苯乙烯容器不适合高温高压灭菌,一旦高温高压处理就会严重变形。
   d. 37℃孵育过夜,可以用parafilm或保鲜膜封住6孔板防止蒸发。
   e. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计数,可以去除染色工作液,加入2毫升PBS,4℃可以保
      存数天;或者加上封片液封片后,4℃可以保存较长时间。
2. 对于悬浮细胞:
   a. 离心收集细胞至1.5ml离心管内,用PBS或HBSS洗涤1次,加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液,室温
      固定15分钟。固定时可以在摇床上缓慢摇动,以避免细胞结成团块。
   b. 离心,吸除细胞固定液,用PBS或HBSS洗涤细胞3次,每次3分钟。
   c. 离心,吸除PBS或HBSS,每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。
   d. 37℃孵育过夜。
   e. 取部分染色后的细胞,滴加到载玻片上或6孔板内,普通光学显微镜下观察。如不能及时观察计
      数,可以离心,去除染色工作液,然后加入1毫升PBS,4℃可以保存数天。如果离心,取细胞用于
      涂片,加上封片液封片后,4℃可以保存较长时间。
3. 对于组织切片:
   a. 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡和水化处理。对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。
   b. 加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液,以充分盖住组织为宜,室温固定不少于15分钟。
   c. 用PBS浸泡洗涤组织3次,每次不少于5分钟。
   d. 吸除PBS,加入适当量的染色工作液。染色工作液的配制方法参考表1。
   e. 37℃孵育过夜,可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发。最好把整个切片浸泡在染色工作液中。
   f. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察,加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。


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